樹状細胞とCD4+ T細胞との相互作用に対する免疫調節薬理剤の効果

まず

、未熟な樹状細胞(DC)に免疫調節薬理学的薬剤を追加します。

DCは、免疫応答中のT細胞増殖の促進に重要な主要な組織適合性複合体、またはMHCクラスII分子および共刺激分子を発現します。

免疫調節剤はDCと結合し、MHCクラスIIおよび共刺激分子の発現のダウンレギュレーションを引き起こし、それによってDCを寛容性樹状細胞またはTolDCに変換します。

TolDCをナイーブCD4+ T細胞と共培養します。

抗原ペプチドを共培養物に追加します。

TolDCはペプチドを内在化し、その後、得られた抗原を処理してMHC分子にロードします。

抗原結合MHC分子は細胞膜に移行します。

ナイーブCD4+ T細胞は、TolDC上の抗原-MHC複合体と直接相互作用します。

成熟DC上の共刺激分子との相互作用により、ナイーブT細胞の完全な活性化が可能になります。

共刺激がなければ、ナイーブCD4+ T細胞は休眠状態のままであり、提示された抗原に対する免疫応答を開始できません。

細胞を1ミリリットルあたり2 x 10⁵樹状細胞の濃度で再懸濁し、目的のトリテルペノイドの適切な実験濃度で摂氏37度で1時間処理します。

インキュベーションの最後の3分の1の間に、T細胞を1 x 10 7細胞/ミリリットル濃度および1マイクロモルCFSEで摂氏37度で15分間再懸濁します。次に、細胞をPBSで洗浄し、容量を1ミリリットルあたり2 x 10⁶ T細胞の最終濃度に再調整します。

処理した樹状細胞100マイクロリットルを、96ウェルプレートの各ウェルで100マイクロリットルのCFSE標識CD4 CD4陽性T細胞と共培養し、100ナノグラム/ミリリットルのOVAペプチド322-329を細胞に添加し、2〜3日後にフローサイトメトリーによってT細胞のCFSE強度を測定します。