限外ろ過装置を用いた細菌培養濾液タンパク質濃度

適切な孔径の垂直再生セルロース膜を含む大容量の遠心フィルター装置を取ります。

バッファーと遠心分離機を追加します。フロースルーを含む膜保湿剤を取り除きます。

可

溶性タンパク質と細胞外小胞を含む細菌培養濾液タンパク質(CFP)、またはEV(細菌が分泌する生体分子を含むナノサイズの脂質結合構造)をデバイスにロードします。

遠心分離中、CFPは遠心力によって膜を接線方向に通過します。

膜の細孔よりも小さい生体分子は培養液とともに通過し、EVなどの大きな生体分子は膜表面を通過するため、膜の目詰まりが最小限に抑えられます。

フィルター

は、生体分子の乾燥を防ぐためにデッドストップ容量によって、CFPを最小のデバイス容量に濃縮します。

バッファーと遠心分離機を追加します。

このバッファーは残留培地成分を置き換え、CFP 生体分子の等張環境を作り出し、その完全性を維持します。

濃縮カップをフィルターカップの上に置き、反転させ、遠心分離します。さらに分析するために、濃縮されたCFP保持物を回収します。

まず、PBSの全容量を追加して、100キロダルトンの分子量カットオフ遠心フィルターを準備します。摂氏4度で2,800倍gで5分間遠心分離します。フロースルーと残りのPBSを廃棄し、サンプルチャンバーにMtb CFPを最大容量まで充填します。体積が限外ろ過装置の最小体積まで減少するまで、摂氏4度で2,800倍gで遠心分離します。サンプル全体が十分に還元されるまで、必要に応じて繰り返します。

濃縮物を含むフィルターユニットに、デバイスの総容量まで1x PBSを追加します。前述のように容量を減らし、この手順を5回繰り返して、完全な洗浄とバッファー交換を確実にします。次に、限外ろ過装置の仕様に従って、100キロダルトン濃縮CFP保持物(100R)を回収します。フィルターを最小容量の1x PBSで少なくとも3回洗浄し、100Rで洗浄を引っ張って回収率を最大化します。