免疫誘発性実生成長阻害の測定

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原体関連分子に由来するタンパク質断片である免疫誘発ペプチド(所望の濃度)を含むウェルに苗木を移植します。

このペプチドは、植物細胞上のパターン認識受容体(PRR)に結合し、シグナル伝達カスケードを開始します。

このカスケードには、酵素的に活性になり、活性酸素種またはROSの生成を触媒する呼吸バーストオキシダーゼホモログ(RBOHタンパク質)のリン酸化が含まれます。

ROS は免疫シグナル伝達経路の二次メッセンジャーとして作用し、PRR によって開始される防御応答を増幅し、直接抗菌剤として機能し、病原体の細胞成分に損傷を与えることで病原体の増殖を阻害します。

ROS の生成中、植物は免疫応答をサポートするためにエネルギーと栄養素を割り当て、成長阻害をもたらす成長関連プロセスから資源をそらします。

新鮮な重量を相関させることにより、未処理の苗木と比較したエリシクター処理された苗木の成長阻害率を決定します。

ペプチド誘発因子の濃度の増加は、免疫応答の高まりとそれに伴う生化学的変化により、苗の成長を阻害します。

終了後4日で、48ウェルプレートの各ウェルに、エリシターペプチドの希釈液を添加した500マイクロリットルのMS培地をロードします。次に、滅菌鉗子を使用して、同じサイズ、年齢、遺伝子型の6〜8本の苗木を各ペプチド希釈液に慎重に移植し、苗木に損傷や根の破損がないように注意し、根が培地に浸

かるように注意します。

すべての苗木がメッキされたら、プレートをマイクロポアテープで密封し、植物を標準的な短日条件下で8〜12日間置きます。成長阻害率を決定するには、各ウェルから苗木を慎重に取り除く前に、写真を撮って成長阻害を視覚的に記録します。次に、根をペーパータオルで軽くたたいて乾かし、分析スケールで各苗の重さを量ります。