0 閲覧数 • 2:49 分 • July 8th, 2025
抗菌ペプチドであるバクテリオシンを産生する乳酸菌(LAB)を含むマウス糞便懸濁液を採取し、予熱したLAB選択的軟寒培地に接種します。
培地を寒天プレートに注ぎ、最初の層を形成します。
2番目の寒天層を重ねてインキュベートします。
最初の層はLABの成長を選択的に促進し、分泌されたバクテリオシン分子がコロニーから周囲の培地に外側に拡散することを可能にします。
2番目の層には、バクテリオシンの拡散を可能にし、表面でのLABコロニーの増殖を防ぐ無細胞培地が含まれています。
次に、バクテリオシン感受性株を含む3番目の寒天層を注ぎます。
第3層で増殖する細菌は、下層から拡散するバクテリオシンに遭遇します。
バクテリオシンは敏感な細菌の細胞膜を破壊し、細胞の恒常性を乱し、細胞死を引き起こし、3番目の層に明確なゾーンとして見えます。
ゾーンの直径を測定して、バクテリオシンの効力を評価します。
糞便サンプル中のバクテリオシン産生細菌細胞をカウントするには、バクテリオシン産生者の希釈細胞を4ミリリットルの予熱したMRS軟寒天培地に移します。ボルテックスによって寒天を混合し、細胞をMRS 1.5%寒天プレートに注ぎます。このレイヤーは、最初のレイヤーと呼ばれます。
さらに4ミリリットルの無細胞0.8%MRS軟寒天培地を最初の層に移し、すべての細胞を軟寒天培地内に埋め込みます。この層は、細胞が寒天プレートの表面でコロニーとして成長するのを防ぐことを目的としています。
滅菌フード内で、蓋を外してプレートを5〜10分間乾燥させてから、プレートを摂氏30度で20〜24時間インキュベートして細胞増殖とコロニー形成を行います。
バクテリオシン産生コロニーを特定するには、適切な指標株の一晩培養物40マイクロリットルを、各プレートに4ミリリットルの予熱した軟寒天と混合します。混合物を皿に注ぎます。この層は 3 番目の層と呼ばれます。
細胞増殖とコロニー形成のために、以前と同様にプレートを乾燥させてインキュベートします。バクテリオシン産生コロニーは、コロニーの周囲に明確な抑制ゾーンを持っています。
本研究では、マウスの糞便サンプル由来の乳酸菌(LAB)によるバクテリオシンの産生について調査します。手法として、アガーレイアリング法を用いてバクテリオシンの活性を評価し、バクテリオシン産生コロニーを同定します。
マウスの糞便検体からバクテリオシン産生乳酸菌を定量的に評価することで、抗菌候補物質の早期評価が可能になります。この層状アガーアッセイは、微生物由来ペプチドの活性を検証するための再現性のあるプラットフォームを提供し、標的バリデーションおよびメカニズムのデリスキングにおける予測信頼性を向上させます。この手法は、さらなるトランスレーショナル研究に向けた強力な抗菌物質産生菌を識別することで、ポートフォリオの優先順位付けに寄与します。
本アッセイは、バクテリオシン産生株を早期に特定し、定量的にランキングしてさらなる特性解析を可能にすることで、探索から前臨床に至る一連の流れに組み込まれます。
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最終更新:29 8月 2026