PBMCと共培養したX線照射上皮細胞におけるTEERの測定

X線照射された上皮単層を含むメンブレンインサートを取ります。

メンブレンインサートを末梢血単核球(PBMC)(サイトカインやその他のシグナル伝達分子を分泌する免疫細胞)を含むウェルに入れます。

経上皮電気抵抗、またはTEER電極をメンブレンインサートに入れます。

小さな電流を流して抵抗を測定し、タイトジャンクションによって調整される単層透磁率を評価します。

タイトジャンクションは、足場タンパク質を介して細胞骨格に結合した膜貫通タンパク質です。

これらの結合タンパク質が一緒になって細胞膜の間に堅牢なバリアを形成し、高分子や病原体の通過を制限します。

無傷の接合タンパク質は電流の流れを妨げ、その結果、高いTEERが得られ、正常な単層透過性を示します。

X線被ばくは、ジャンクションタンパク質レベルを低下させ、単層透過性を高め、TEERを低下させます。

さらに、照射された細胞からのシグナル伝達分子は、サイトカインを放出する共培養PBMCを活性化し、ジャンクションタンパク質レベルのさらなる低下を引き起こし、バリアの完全性を破壊します。

その結果、単層透過性が増加し、TEERがさらに低下します。

照射直後のCaco-2細胞の経上皮電気抵抗(TEER)を評価するには、Caco-2細胞培養インサートの半分を、各ウェルに3ミリリットルの新鮮完全培地を入れた新しいプレートに移し、インサート培養物の半分をウェルあたり3ミリリットルの完全培地あたり2 x 10⁶ PBMCを播種した新しいプレートに移します。次に、TEER箸電極を細胞培養インサートに最初の6時間は1時間ごとに入れ、その後は照射後48時間まで3時間ごとに

入れます。