0 閲覧数 • 3:37 分 • July 8th, 2025
栄養素を含む寒天プレートから始めて、阻害剤産生一次細菌の一晩培養物を中央に一滴置きます。
培養物を乾燥させ、細菌の拡散を最小限に抑え、インキュベートします。
個々の細菌は異なるコロニーを形成し、抗菌化合物(寒天を通って一定の距離まで拡散する阻害剤分子)を分泌します。
競合細菌株の希釈培養物を、初代細菌のコロニーを含む寒天表面に均一にスプレーします。
インキュベーション中、抗菌化合物は競合する細菌と相互作用し、それらの本質的な細胞プロセスを破壊します。
これにより、その特定の領域で競合する細菌が死滅し、細菌の増殖が大幅に減少します。
抗菌化合物のない地域では、競合する細菌が栄養素を利用し、異なるコロニーを形成します。
これにより、明確な抑制ゾーンを持つ異なる成長パターンが作成されます。このゾーンの直径とゾーンの透明度を決定して、細菌由来の抗菌化合物の効果を評価します。
細菌の一晩培養を調製するには、競合他社株と阻害剤株を滅菌BHI寒天プレートにストライクし、摂氏37度で好気性で約18時間インキュベートします。28ミリリットルのユニバーサルボトルで、10ミリリットルの滅菌BHIブロスに、必要な競合他社の細菌株の単一コロニーを接種します。
培養物を摂氏37度、250RPMのユニバーサルオービタルシェーカーで一晩インキュベートします。翌日、寒天プレートが完全に乾いて蓋に結露がないことを確認し、接種液がプレートに広がらないようにします。25マイクロリットルの一晩培養物を寒天プレートの中央にピペットでピペットでかけ、ピペットプランジャーを完全に押し下げないようにして、寒天全体に培養物を噴霧する気泡を防ぎます。
培養物の拡散を制限するために、培養物を室温で乾燥させます。次に、寒天プレートを摂氏37度で一晩好気的にインキュベートします。吸収紙で裏打ちされたレベル2の安全キャビネットの下で作業しながら一晩培養した後、BHIブロスを使用して培養物を10倍に希釈し、ミリリットルあたり約4倍の10〜6番目のCFUを収量します。次に、希釈した培養物を滅菌プラスチック製の香水気化器ボトルに注ぎます。
遅延増殖阻害アッセイを実行するには、寒天に噴霧する前に、培養物がスプレー機構にロードされていることを確認するために、各気化器ボトルを通して培養物を噴霧します。寒天から約15センチメートルの距離から、寒天表面全体に約250マイクロリットルの希釈培養物を噴霧します。プレートを摂氏37度で一晩好気的にインキュベートします。
遅延成長阻害を解釈するには、スプレーされた競合株の成長阻害ゾーンをミリメートル単位で測定し、阻害剤生産者の中心スポットの直径を差し引きます。最後に、テキストプロトコルに従って抑制ゾーンの明瞭度スコアを記録します。