分散アッセイによるバイオフィルム分解の検出

細菌

バイオフィルム(保護細胞外高分子物質またはEPS内にカプセル化された細菌)を含むマルチウェルプレートから始めます。

培地を吸引して非付着細菌を除去し、洗浄します。

バイオフィルム含有ウェルを、緩衝液のみ、グルコース緩衝液、胆汁酸塩緩衝液、またはグルコースと胆汁酸塩による緩衝液のいずれかで処理します。

緩衝液とグルコース処理は、バイオフィルムのEPSを分解する細菌酵素の放出をサポートします。

これにより、バイオフィルムが分解され、細菌が放出されます。

胆

汁酸塩と胆汁酸塩とグルコース治療の組み合わせは、ストレス状態を模倣し、保護EPS内に細菌を保持します。

上清を各ウェルから新鮮なマルチウェルプレートに移します。

寒天プレート上の希釈上清をスポットし、インキュベートします。

細菌コロニーを列挙し、各処理の細菌分散を決定します。

胆汁酸塩処理と比較して、緩衝液およびグルコース処理による分散が高い場合は、バイオフィルムの分解を示します。

コントロールウェルをブランクに設定して、プレートリーダーに一晩バイオフィルムプレートのOD₆₀₀値を記録します。次に、プラスチック表面の付着体を乱すことなく、真空ラインを使用して培地を吸引します。ウェルを200マイクロリットルの滅菌PBSで2回穏やかに洗浄します。

予

熱したPBSを130マイクロリットルでPBSで洗浄した後、PBSをグルコース、PBSを胆汁酸塩、PBSを胆汁酸塩とグルコースで3つのウェルのそれぞれに洗浄します。次に、プレートを摂氏37度で30分間インキュベートします。30分後、インキュベーターからプレートを取り出します。上清を新鮮な滅菌96ウェルプレートにピペットで取り出します。

最後に、96ウェルプレートまたは希釈ブロックでPBSを含む上清の1〜10回の連続希釈液を調製します。次に、マルチチャンネルピペットを使用して、各希釈液5マイクロリットルをLB寒天プレートに移します。プレートを摂氏37度で一晩インキュベートします。翌日、コロニーの数を数えます。