JoVE 実験百科事典
免疫学
0 回視聴 • 3:06 分 • December 23rd, 2025
クリプトコッカスの真菌懸濁液から始めます。pH感受性蛍光色素と結合した真菌由来の生体粒子の溶液を加えて、クリプトコッカス細胞を染色します。
洗浄して結合していない染料を取り除きます。染色した真菌懸濁液を、マクロファージ(または食作用免疫細胞)が付着したマルチウェルプレートに移します。
アスピリンやイブプロフェンなどの薬物の最小阻害濃度を導入し、薬物の取り込みを促進するためにインキュベートします。
薬物分子は、プロスタグランジン合成酵素であるシクロオキシゲナーゼ-2と相互作用し、その活性を阻害します。
これにより、アラキドン酸のプロスタグランジンへの変換が妨げられ、細胞内 cAMP レベルが維持され、マクロファージの食作用能力が強化され、真菌の内在化が促進されます。
真菌を含むファゴソームは、酸性細胞小器官であるリソソームと融合し、酸性pHのファゴリソソームを形成し、色素が蛍光を発できるようにします。
薬物処理された細胞は未処理の細胞よりも高い蛍光を示し、マクロファージの食作用を高める薬剤の有効性を示唆しています。
テキストプロトコルに記載されているように、完全なRPMI 1640培地で増殖したマウスマクロファージ細胞株の培養から始めます。
さらに、テキストプロトコルに記載されているように、PBSに再懸濁したクリプトコッカスネオフォルマンスの培養物を所望の濃度に調製します。
食作用染色でクリプトコッカス細胞を染色するには、999マイクロリットルの細胞を微量遠心チューブに分注します。1マイクロリットルのステインをチューブに加えます。細胞を室温で暗所で1時間インキュベートし、ゆっくりと攪拌します。
インキュベーション後、最初の遠心分離によって細胞を洗浄します。次に、上清を捨てます。細胞をPBSで再懸濁し、洗浄ステップをさらに2回繰り返します。
100マイクロリットルのクリプトコッカス・ネオフォルマンス細胞懸濁液を、培養マクロファージを含む96ウェルプレートのウェルに分注します。
マクロファージ食作用に対する試験薬の効果を研究するには、テキストプロトコルに記載されているように、目的の試験薬を100マイクロリットルを96ウェルプレートの適切なウェルに分注します。
プレートを二酸化炭素インキュベーターで2〜6時間インキュベートします。インキュベーションの最後に、食作用染色からの蛍光を測定します。