マウスで誘導機械的異痛症の倹約神経損傷（SNI）モデル

この手順の全体的な目標は、末梢神経損傷後の神経因性疼痛のマウスモデルを確立することです。これは、最初にマウスに麻酔をかけ、後肢を適切な位置に置き、坐骨神経を露出させることによって達成されます。次に、坐骨神経の2つの枝を縫合することにより、定義された神経損傷が導入され、3番目の枝は無傷のままになります。

このビデオでは、脛骨神経と総会陰神経を縫合して切断し、痛みのある神経を温存しています。ただし、神経損傷後に他の組み合わせを適用することができます。ミサは、金網のテーブル上のシリンダー容器に入れられ、ミサを慣らし、その後、誘発された機械的異痛症の定量的測定を可能にするフォンフレイアッセイを使用してテストされました。

校正されたフォンフレイフィラメントは、手術された細孔の外側領域に昇順で適用されます。手術後肢と未評価の後肢の機械的閾値を検出するために、痛みを伴う反応は、フィラメント刺激による急速な毛穴の離脱、ひるみ、または毛穴を舐めると定義されます。最終的に、手術された脚の機械的異痛症の進行は、非評価側と比較した機械的閾値を経時的にプロットすることで視覚化でき、末梢神経損傷後のさまざまな分子経路や薬物治療の調査が可能になります。

この方法は、神経因性疼痛の発症に関与する分子経路など、末梢神経損傷の分野における重要な質問に答えるのに役立ちます。さらに、痛みの発達を損なう、または痛みの症状を緩和することを目的とした薬も、手術の2日前にテストでき、マウスを静かな部屋の金網テーブルに配置された赤い色のプラスチックシリンダーに入れ、マウスをシリンダー内の15分間慣れさせ、15分後にテストし、マウスが落ち着いていることを確認してから、フォンフレイフィラメントを昇順で適用します。 0.02グラムのフィラメントから始めます。まず、左の細孔の外側領域に合計30秒間で5回力を加え、各適用後にマウスの反応を測定し、同じフィラメントと他のマウスの左の細孔で繰り返し、次に右の細孔で再度やり直してから次のフィラメントに移ります。

陽性の疼痛反応は、突然の毛穴の離脱、つま先の広がり、またはフィラメントによって誘発される過度の毛穴の舐めとして定義され、5回の反復刺激のうち3回の肯定的な反応は、痛みの閾値として定義されます。ケタミンとキシラジンの混合物の腹腔内注射によって動物に麻酔をかけ、完全に麻酔されるまで動物を静かな場所に置きます。尻尾の先をつまんで反射神経を確認し、ピンセットで一時停止し、動物が反応しないことを確認してから先に進みます。

次に、脱水症状を避け、電気シェーバーを使用して感染を防ぐために、0.5ミリリットルの等張性生理食塩水に抗生物質を皮下注射し、右利きの場合は膝の少し下から股関節領域まで手術野を剃ります。左後肢で作業している人が一番便利かもしれません。綿の壁のつぼみで目に軟膏を塗ります。

動物を右側に置き、左後肢を小さなプラットフォームに置いて持ち上げ、粘着テープで脚を固定します。動物が配置されたら、手術部位からエタノールとベタジンを交互にスクラブして手術野を消毒し、左手の親指で膝を乾燥させ、メスを使用して膝の近位の縦方向に小さな切開を行います。ハサミの先端を使用して鈍い解剖によって皮膚を開きます。

次に、マウスを実体顕微鏡の下に置き、大腿骨の近くにはっきりと見える血管を見つけます。次に、鈍い解剖によって筋肉層を分離します。正しく行えば、筋肉の層は出血することなく簡単に分離し、筋肉の真下にある坐骨神経が現れます。

近くの血管の損傷により出血が発生した場合は、綿の壁のつぼみまたはガーゼを使用して、出血が止まるまで押して血液を吸収します。分離した筋肉層を2番のピンセットで慎重に広げます。坐骨神経を視覚化するには、必要に応じて開創器を適用し、坐骨神経から腓腹神経が分岐する領域を特定します。

腓腹神経は、左脚の右に枝分かれしている3つの枝の中で最も小さいです。C 57では、黒色の6匹のマウスが他の2つの枝の周りに6つのゼロ縫合糸をしっかりと適用しますが、これはまだ並行して実行されています。ソレルの枝に触れないように細心の注意を払ってください。

縫合糸の下に切断する神経を5番ピンセットでつかみ、次に小さなハサミでピンセットの上と下に神経を切断して、神経が引っ張られないようにします。神経が切断されたら、はさみで縫合糸の端を切り取り、筋肉層を静かに閉じます。通常、縫合リングは必要ありません。

傷口にリドカインを一滴加え、外科的結び目で縫合します。目の軟膏がまだ十分かどうかを確認し、マウスを清潔なケージとペーパータオルに入れます。快適な姿勢で、簡単にアクセスできる水とチャウを用意してください。

部屋が寒い場合。術後の回復の1日後にケージの一部の下にヒートパッドを置き、ベースライン測定値を収集するために説明したように、操作されたマウスと偽の操作されたマウスの両方からフォンフレイ測定値を収集します。ここでは、4〜6匹のマウスのグループに対するフォンフレテストの結果が、手術の1日前とその後の手術後2週間の毎日の両方を示しています。手術の翌日、動物は手術された毛穴または同側の毛穴に重大な機械的過敏症を発症しましたが、手術されていない毛穴または反対側の毛穴は影響を受けません。

反対側の閾値は、偽の手術を受けたマウスと比較してわずかに減少しており、手術されたマウスではMIアロディニアが軽度に発生する可能性があることを示しています。このビデオを見た後、麻酔をかけたマウスのS神経の枝を見つけて操作する方法をよく理解しているはずです。フレイアッセイはさらに、部分的な末梢神経損傷後のトランスジェニック動物または薬物の反応をテストするための定量的な機能読み出しを可能にします。