マウス尿グルコース濃度の定性的および定量的評価のためのアッセイ

新鮮なマウスの尿を一滴取り、グルコースオキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、および発色原を含むグルコース検出ストリップを浸します。

グルコースオキシダーゼは尿中グルコースを酸化し、グルコノラクトンと過酸化水素を形成します。

さらに、ペルオキシダーゼは過酸化水素を利用して発色原の酸化を触媒し、尿中グルコース濃度に比例する強度で着色された生成物を形成します。

尿ブドウ糖の定性的評価のために、ストリップの参照チャートと色を比較します。

定量的な尿グルコース測定には、グルコース濃度標準と、定義された期間にわたって収集されたマウス尿サンプルを含むマルチウェルプレートを採取します。

グルコースオキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、および指示薬カップリング試薬を含むアッセイ混合物を追加します。

グルコースオキシダーゼはグルコースの酸化を促進し、グルコノラクトンと過酸化水素を形成します。ペルオキシダーゼはカップリング試薬と過酸化水素の間の反応を触媒し、ピンク色の生成物を形成します。

マイクロプレートリーダーを使用して、着色された製品の吸光度を測定します。

生成されたグルコース標準曲線を使用して、尿中のグルコース濃度を測定します。

まず

、きれいなパラフィルムを平らな面に置きます。マウスの尻尾をそっと持ち上げ、パラフィルムの上に置きます。

親指と人差し指を使ってマウスの首筋を拘束し、ストレス反応としてマウスに排尿させます。尿の一滴がパラフィルムの表面に落ちるのを待ってから、マウスをケージに戻します。

グルコース検出ストリップの試薬端を新鮮な尿滴に浸します。すぐにストリップを取り外し、色面を上にして表面に平らに置きます。次に、ストリップに色が完全に現像するまで少なくとも 30 秒待ちます。現像色をメーカーが提供する参照チャートと比較します。

製造元の指示に従って代謝ケージを組み立て、飼料アセンブリに粉末チャウを充填してから、上部チャンバーの適切な金属タブに取り付けます。

ウォーターボトルサポートを上部チャンバーの残りの金属タブに固定します。空のウォーターボトルに水を入れ、ボトルサポートにスライドさせ、シッパーチューブが穴の中にあることを確認します。

1匹のマウスを代謝ケージに入れ、蓋で覆い、ケージの蓋が正しく取り付けられていることを確認します。採尿チューブと糞便採収チューブをチャンバーの下部床のそれぞれの場所に配置します。

24時間後、採尿チューブを取り出し、グルコースアッセイを実行して尿グルコース濃度を測定します。グルコースアッセイを同日に行わない場合は、尿サンプルを摂氏マイナス80度の冷凍庫で凍結します。

凍結尿サンプルを使用する場合は、最初に解凍してください。アッセイキットの指示に従って、デシリットルあたり25〜0ミリグラムの範囲の8つの標準を調製します。

キットのマニュアルに従って、