マウスにおける冠動脈結紮のために修飾されたテクニック

この手順の全体的な目的は、マウスに心筋梗塞を誘発することです。まず、中腋窩線に沿って皮膚を切開します。次に、第3肋骨と第4肋骨の間で左開胸術を行い、心臓を露出させます。

次に、左前下行枝の近位部を結紮します。最後に、胸腔を閉鎖し、マウスをケージに戻して自然回復させます。最終的に、心筋梗塞の状態を心電図または心エコー図を用いて評価することができます。

左冠動脈に近い部位の結紮は習得が困難であるため、本手法を視覚的に提示することは極めて重要です。左冠動脈の開口部の直下に結紮を行うことで、十分な心筋梗塞が確保されます。ただし、致死的な出血を引き起こす可能性があるため、左冠動脈を穿刺しないように注意することが重要です。

手術を開始するため、6週齢以上のマウスを2〜5%のフルオリン（フルラン）を吸入させて麻酔をかけます。足指をピンチして、動物が十分に麻酔されていることを確認してください。マウスが完全に鎮静されたら、手術エリアに移動させ、上に配置します。

マウスを温熱パッドに戻します。温度を37 °Cに一定に保つため、直径0.2 cmのチューブと空気中に2%のイソフルランを混合したガスを用い、イソフルラン導入チャンバーを備えた挿管装置にマウスを固定します。チューブをマウスの気管に挿入します。

左側の前胸部を剃毛し、ベタジンで消毒します。その後、75% ethanolで3回ずつ消毒します。また、滅菌鋏を用いてマウスの眼に眼軟膏を塗布します。

中腋窩線に沿って1.5 centimeterの切開を加えます。このアプローチにより、その後の心エコー評価が容易になります。これらの幼若マウスにおいて、下層組織への損傷を避けるため、メスではなくハサミを使用します。

次に、鈍端の血管鉗子を用いて、前胸筋を胸壁から剥離し、牽引します。第3肋骨と第4肋骨の間で左開胸を行い、心臓の前面と左肺を可視化します。さらに、適切な眼瞼開創器を用いて胸壁を牽引します。

歯状鉗子と鈍的剪刀を用いて視認性と操作性を向上させるため、心膜を除去します。次に、動脈の結紮に使用する7-0ロン縫合糸と針を準備します。結紮糸と動脈の間に心筋の一部を挟むようにして、針を動脈の下に通し、左冠動脈を結紮します。

第3肋骨と第4肋骨に2針縫合し、胸腔を閉鎖します。イソフルラン濃度を0.5%まで下げ、5-0エチレン縫合糸を用いて皮膚を3針縫合します。術後鎮痛のため、ブプレノルフィン0.05 mg/kgを腹腔内投与します。

最後に、マウスを温めたケージに入れ、自然回復を待ち、飲水に0.6 mg/mLのブプレノルフィンを添加します。心筋梗塞の影響を調べるため、術後24時間はマウスを注意深く観察してください。侵襲的な手法として最適なのは、術後数日経ってから超音波心エコー図法を用いて心機能を評価することです。

本プロトコルを用いて左冠動脈を結紮することにより、左心室の約40%に及ぶ心筋虚血が誘発されます。これにより、結紮前後に測定したこれらの代表的なECGに示されているように、STセグメントに有意なECG変化が誘発されます。心筋梗塞前。

ECGで記録されたQRS波形は狭く、短くなっています。心筋梗塞後には、明らかなST分節の上昇が見られ、それがQRS波形に埋もれることで、QRS波形は心筋梗塞前の記録よりも大幅に幅広く、高くなります。心筋梗塞の影響を調べるため、MI手術の数日後に超音波心エコー図法を用いて心機能を評価してください。

ここでは、偽手術を施したマウスから得られた心エコー図の記録を示します。偽手術マウスで見られる良好な心収縮とは対照的に、MIマウスでは異なります。

MI（心筋梗塞）から72時間後、収縮期において左室遊離壁に顕著なアキネジア（壁運動停止）が認められます。この動画を視聴することで、心筋梗塞のマウスモデルについて十分に理解し、自身の研究室でこのモデルを構築できるようになるはずです。