Name: マウスにおける冠動脈結紮のために修飾されたテクニック (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-03-29T12:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 47 s
Description: 学ぶマウス心筋梗塞モデルの作成法。左前下行枝冠動脈結紮により心筋虚血を誘導し、心エコー図や心電図で心機能を評価できます。心血管研究や治療法開発に有用な実験手法です。

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1。プロトコルテキスト<ol><li>手術に進む前に、6週齢または2から5パーセント、イソフルランの吸入による古けれ雄マウス（C57BL / 6）を麻酔。動物が十分に麻酔であることを確認するためにつま先のピンチを実行します。 </li><li>無意識のマウスは37℃の一定温度を維持するために暖かいパッドの上に仰向けに置かれ左側胸部胸部を剃毛されています。 </li><li>イソフルラン充填室で挿管デバイスにマウスを固定します。口からマウスの気管内に0.2内径のチューブを挿入し、無菌手術領域（37℃温度調節器によって）挿管にマウスを置いて、人工呼吸器（分あたり120のレートの圧力に気管内チューブを接続4月6日MMH 2 O）は、ベタジンと75％エタノールで領域を消毒。 </li><li>マウスの目に眼軟膏を適用します。足で標準のECG電極を置き、心電図レコーダーにマウスを接続します。 </li&gt; <li>半ば腋窩線に沿って1.5センチメートル切開を作るために滅菌ハサミを使用します。はさみは、マウスにおける皮下組織への損傷を避けるために、メスではなく、使用されています。その後、胸壁から前胸部の筋肉を切開し、撤回するブラントチップ容器はさみを使用しています。 </li><li>心臓と左肺の前方表面を可視化するために、第3および第4肋骨の間の左開胸を行います</li><li>さらに可視化とアクセシビリティを向上させるために、適切なリトラクターを使用して胸壁を撤回。歯鉗子、鈍先端がハサミを使って、心膜を取り除きます。 </li><li>リガチャーと動脈の間に心筋のバンドと一緒に動脈の下に針を（7-0 ethilon縫合糸で添付）を配置することにより、左冠動脈を結紮する。冠状動脈の閉塞に成功し、前方左心室壁のhypokinesis /無動でと心電図記録（ 例えば、ST上昇、QRS broadeniの変化によって確認されNG） </li><li> 3番目と4番目のリブ上に2つのステッチを（6-0 ethilon縫合）を配置することにより、胸を閉じます。 </li><li>皮膚を閉じるために5から0 ethilon縫合糸を使用しています。 </li><li>術後鎮痛のために、ブプレノルフィン（0.05 mg / kg）の単回腹腔内注射を投与。動物が自発的にイソフルラン麻酔を停止した後に2から5分以内に回復します。最後に、暖かいケージにマウスを置き、飲料水（テキストオーバーレイ：飲料水に0.6 mg / ml）の中のブプレノルフィン0.6 mg / mlのを提供し、術後の苦痛を防止する。密接に手術後の最初の24時間のためにマウスを監視します。 </li><li>心エコー検査は、3日心筋梗塞後の心機能を評価するために実施されています。成功した手順は、前方左心室壁における無動（結果で囲んでビデオを参照）によって検証されます。実験終了時に、心がさらなる調査のために、80℃に収 ​​集され保存されます。 すなわち遺伝子発現が。 </li></ol>

<ol><li>Tabrizchi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beta-blocker+therapy+after+acute+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Rev.+Cardiovasc.+Ther%22%5BJournal%5D)">Beta-blocker therapy after acute myocardial infarction.</a> Expert Rev. Cardiovasc. Ther. 11, 293-296 (2013).</li>
<li>Pell, S., Fayerweather, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trends+in+the+incidence+of+myocardial+infarction+and+in+associated+mortality+and+morbidity+in+a+large+employed+population%2C+1957-1983%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Trends in the incidence of myocardial infarction and in associated mortality and morbidity in a large employed population, 1957-1983.</a> N. Engl. J. Med. 312, 1005-1011 (1985).</li>
<li>Ramunddal, T., Gizurarson, S., Lorentzon, M., Omerovic, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antiarrhythmic+effects+of+growth+hormone--in+vivo+evidence+from+small-animal+models+of+acute+myocardial+infarction+and+invasive+electrophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Electrocardiol%22%5BJournal%5D)">Antiarrhythmic effects of growth hormone--in vivo evidence from small-animal models of acute myocardial infarction and invasive electrophysiology.</a> J. Electrocardiol. 41, 144-151 (2008).</li>
<li>Thom, T., Haase, N., Rosamond, W., Howard, V. J., Rumsfeld, J., Manolio, T., Zheng, Z. J., Flegal, K., O'Donnell, C., Kittner, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+disease+and+stroke+statistics--2006+update%3A+A+report+from+the+american+heart+association+statistics+committee+and+stroke+statistics+subcommittee%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Heart disease and stroke statistics--2006 update: A report from the american heart association statistics committee and stroke statistics subcommittee.</a> Circulation. 113, 85-151 (2006).</li>
<li>van den Bos, E. J., Mees, B. M., de Waard, M. C., de Crom, R., Duncker, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+model+of+cryoinjury-induced+myocardial+infarction+in+the+mouse%3A+A+comparison+with+coronary+artery+ligation%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">A novel model of cryoinjury-induced myocardial infarction in the mouse: A comparison with coronary artery ligation.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 289, 1291-1300 (2005).</li>
<li>Omerovic, E., Ramunddal, T., Lorentzon, M., Nordlander, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+neuropeptide+y2+receptor+blockade+on+ventricular+arrhythmias+in+rats+with+acute+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Effects of neuropeptide y2 receptor blockade on ventricular arrhythmias in rats with acute myocardial infarction.</a> Eur. J. Pharmacol. 565, 138-143 (2007).</li>
<li>Ahn, D., Cheng, L., Moon, C., Spurgeon, H., Lakatta, E. G., Talan, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+myocardial+infarcts+of+a+predictable+size+and+location+by+branch+pattern+probability-assisted+coronary+ligation+in+c57bl%2F6+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Induction of myocardial infarcts of a predictable size and location by branch pattern probability-assisted coronary ligation in c57bl/6 mice.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 286, 1201-1207 (2004).</li>
<li>Lindbom, M., Ramunddal, T., Camejo, G., Waagstein, F., Omerovic, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+effects+of+myocardial+creatine+depletion+on+left+ventricular+function+morphology+and+lipid+metabolism%3A+Study+in+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Card+Fail%22%5BJournal%5D)">In vivo effects of myocardial creatine depletion on left ventricular function morphology and lipid metabolism: Study in a mouse model.</a> J. Card Fail. 14, 161-166 (2008).</li>
<li>Omerovic, E., Bollano, E., Basetti, M., Kujacic, V., Waagstein, L., Hjalmarson, A., Waagstein, F., Soussi, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioenergetic%2C+functional+and+morphological+consequences+of+postinfarct+cardiac+remodeling+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Cell.+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Bioenergetic, functional and morphological consequences of postinfarct cardiac remodeling in the rat.</a> J. Mol. Cell. Cardiol. 31, 1685-1695 (1999).</li>
<li>Gao, E., Lei, Y. H., Shang, X., Huang, Z. M., Zuo, L., Boucher, M., Fan, Q., Chuprun, J. K., Ma, X. L., Koch, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+and+efficient+model+of+coronary+artery+ligation+and+myocardial+infarction+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">A novel and efficient model of coronary artery ligation and myocardial infarction in the mouse.</a> Circ. Res. 107, 1445-1453 (2010).</li>
</ol>

特別な利害関係は宣言されません。

本報告書で示したように、LCA結紮のため外科的処置は、マウス3,6の実験的心筋梗塞の誘導のための信頼性と再現性の高い方法です。このプロトコルに従ってLCAのライゲーションは、典型的には魅力的心筋虚血を誘発〜左心室3の40％。これは、心臓の前面にST部分7と可視蒼白の大幅な心電図変化を誘導する。大心筋梗塞が原因で、死亡率は30％まで8,9にすることができます。ノートは梗塞心筋領域とMI後死亡率は様々な動物の系統間で異なるかもしれないことになされるべきである。方法はいくつかの利点を有する。半ば腋窩線に沿ってではなく、前胸壁の皮膚切開の配置は、心エコー検査と後の調査が容易になります。手術創におけるstichesは、心臓の前方セグメントの超音波画像診断の妨げにはなりません。また、マウスの挿管は、オペレータが可能になります手術を行うための十分な時間を持っています。これは重度の徐脈や低酸素グローバル10を誘導するように胸の中に&quot; その場で &quot; LCAのライゲーションは、外部化の後に、LCAのライゲーショ...

マウスにおける冠動脈結紮のために修飾されたテクニック

Modified Technique for Coronary Artery Ligation in Mice

心筋梗塞（MI）は、1月3日 、人間の死亡率の最も重要な原因の一つである。心筋梗塞患者において罹患率と死亡率を改善するために我々は、心筋虚血の病態生理についてのよりよい知識を必要としています。この知識は、4革新的な心血管治療のための新しい治療標的を定義することは貴重であるかもしれません。マウスの実験ミシガンモデルはMIは左冠動脈（LCA）の5の永続的または一時的なライゲーションによって誘発された臨床研究でますます人気の小動物モデルである。このビデオでは、マウスで実験的心筋梗塞を誘発する方法をステップバイステップ方法について説明します。 動物は2％イソフルランを持つ最初の麻酔です。無意識のマウスは、その後挿管と人工換気のために人工呼吸器に接続されています。左胸を剃毛され、半ば腋窩線に沿って1.5センチメートル切開を皮膚で作られています。左大胸筋はぶっきらぼうdissocです肋骨が露出するまでiated。筋層はさておき引っ張って瞼リトラクタと固定されています。これらの準備の後、左開胸心臓と左肺の前表面を可視化するために、3番目と4番目のリブの間で行われます。 LCAの動脈の近位のセグメントは、一般的に梗塞サイズ〜左心室の40％を誘発7から0 ethilon縫合糸で結紮する。終了時には、胸が閉じられ、動物（Temgesic、0.3 mg/50ミリリットル、ip）を術後鎮痛法を受けています。動物は自然回復するまで暖かいケージ内に保持されます。

<table border="1"><tbody><tr><td> 楽器 </td><td> 関数の説明 </td></tr><tr><td>ブラントチップはさみ</td><td>皮膚、肋間胸筋、および縫合糸を切断するために使用</td></tr><tr><td>アイ·リトラクター</td><td>外科ビューを公開するために使用</td></tr><tr><td>ブラントチップ鉗子</td><td>皮膚や筋肉を把握するために使用</td></tr><tr><td>ニードルホルダー</td><td>針を保持するには</td></tr><tr><td> 5から0縫合</td><td>皮膚を縫合するために使用</td></tr><tr><td> 6から0縫合</td><td>胸の筋肉を縫合するために使用</td></tr><tr><td> 7から0縫合</td><td>冠動脈を結紮するために使用</td></tr></tbody></table>心筋梗塞の手順で使用される表1。楽器。 <p class="jove_content" f...

マウスにおける実験的心筋梗塞を誘発するために用いる外科手術は、心臓や肺の左前方の表面を可視化するために、3番目と4番目のリブの間に左開胸で始まります。左冠動脈を結紮され、胸が閉じているとマウスが自発的に回復させる。

心筋梗塞（MI）は、ヒトにおける最も重要な死因の一つである1-3。MI患者の罹患率および死亡率を改善するために...

この手順の全体的な目的は、マウスに心筋梗塞を誘発することです。まず、中腋窩線に沿って皮膚を切開します。次に、第3肋骨と第4肋骨の間で左開胸術を行い、心臓を露出させます。次に、左前下行枝の近位部を結紮します。最後に、胸腔を閉鎖し、マウスをケージに戻して自然回復させます。最終的に、心筋梗塞の状態を心電図または心エコー図を用いて評価することができます。左冠動脈に近い部位の結紮は習得が困難であるため、本手法を視覚的に提示することは極めて重要です。左冠動脈の開口部の直下に結紮を行うことで、十分な心筋梗塞が確保されます。ただし、致死的な出血を引き起こす可能性があるため、左冠動脈を穿刺しないように注意することが重要です。手術を開始するため、6週齢以上のマウスを2〜5%のフルオリン（フルラン）を吸入させて麻酔をかけます。足指をピンチして、動物が十分に麻酔されていることを確認してください。マウスが完全に鎮静されたら、手術エリアに移動させ、上に配置します。マウスを温熱パッドに戻します。温度を37 °Cに一定に保つため、直径0.2 cmのチューブと空気中に2%のイソフルランを混合したガスを用い、イソフルラン導入チャンバーを備えた挿管装置にマウスを固定します。チューブをマウスの気管に挿入します。左側の前胸部を剃毛し、ベタジンで消毒します。その後、75% ethanolで3回ずつ消毒します。また、滅菌鋏を用いてマウスの眼に眼軟膏を塗布します。中腋窩線に沿って1.5 centimeterの切開を加えます。このアプローチにより、その後の心エコー評価が容易になります。これらの幼若マウスにおいて、下層組織への損傷を避けるため、メスではなくハサミを使用します。次に、鈍端の血管鉗子を用いて、前胸筋を胸壁から剥離し、牽引します。第3肋骨と第4肋骨の間で左開胸を行い、心臓の前面と左肺を可視化します。さらに、適切な眼瞼開創器を用いて胸壁を牽引します。歯状鉗子と鈍的剪刀を用いて視認性と操作性を向上させるため、心膜を除去します。次に、動脈の結紮に使用する7-0ロン縫合糸と針を準備します。結紮糸と動脈の間に心筋の一部を挟むようにして、針を動脈の下に通し、左冠動脈を結紮します。第3肋骨と第4肋骨に2針縫合し、胸腔を閉鎖します。イソフルラン濃度を0.5%まで下げ、5-0エチレン縫合糸を用いて皮膚を3針縫合します。術後鎮痛のため、ブプレノルフィン0.05 mg/kgを腹腔内投与します。最後に、マウスを温めたケージに入れ、自然回復を待ち、飲水に0.6 mg/mLのブプレノルフィンを添加します。心筋梗塞の影響を調べるため、術後24時間はマウスを注意深く観察してください。侵襲的な手法として最適なのは、術後数日経ってから超音波心エコー図法を用いて心機能を評価することです。本プロトコルを用いて左冠動脈を結紮することにより、左心室の約40%に及ぶ心筋虚血が誘発されます。これにより、結紮前後に測定したこれらの代表的なECGに示されているように、STセグメントに有意なECG変化が誘発されます。心筋梗塞前。ECGで記録されたQRS波形は狭く、短くなっています。心筋梗塞後には、明らかなST分節の上昇が見られ、それがQRS波形に埋もれることで、QRS波形は心筋梗塞前の記録よりも大幅に幅広く、高くなります。心筋梗塞の影響を調べるため、MI手術の数日後に超音波心エコー図法を用いて心機能を評価してください。ここでは、偽手術を施したマウスから得られた心エコー図の記録を示します。偽手術マウスで見られる良好な心収縮とは対照的に、MIマウスでは異なります。MI（心筋梗塞）から72時間後、収縮期において左室遊離壁に顕著なアキネジア（壁運動停止）が認められます。この動画を視聴することで、心筋梗塞のマウスモデルについて十分に理解し、自身の研究室でこのモデルを構築できるようになるはずです。

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