ヒトPBMC移植ヒト異種移植マウスモデルの生成技術

機能免疫細胞として好中球と単球のみを持つ免疫不全マウスを取ります。

免疫前駆細胞を標的とする薬剤であるシクロホスファミドを腹腔内注射します。

この薬は活発に増殖する免疫前駆細胞に入り、核酸を架橋して細胞死を引き起こします。前駆細胞の死は免疫細胞の枯渇につながります。

シクロホスファミドと付加物を形成する薬剤であるジスルフィラムを経口投与し、シクロホスファミドによる副作用を軽減します。

ヒト腫瘍細胞と末梢血単核細胞(PBMC)の混合物を適切なゼラチン状タンパク質混合物に皮下注射します。

タンパク質混合物はゲルを形成し、生理学的細胞外マトリックスを模倣し、腫瘍細胞を捕捉します。

機能的な免疫細胞の枯渇により、腫瘍細胞が増殖して新しい血管を形成し、固形腫瘍の異種移植片に変化します。

同時に、注入されたPBMCからのT細胞が腫瘍に浸潤します。

腫瘍異種移植片は、増殖と腫瘍浸潤性T細胞を示し、ヒト化異種移植マウスモデルを確立します。

骨髄細胞の枯渇については、シクロホスファミドのキログラムあたり100ミリグラムを腹腔内送達し、6〜8週齢のNOD / SCID雌マウスに1キログラムあたり125ミリグラムのジスルフィラムを1日1回、2日間経口送達します。シクロホスファミドおよびジスルフィラムの2回目の投与の24時間後、5 x 10⁶の新鮮な単離ヒトPBMCおよび2.5 x 10⁶を再懸垂しますヒト腫瘍細胞株細胞を200マイクロリットルのPBSと50%マトリゲルに1匹当たり投与し、全容量を各実験動物の右脇腹に皮下注射します。原発腫瘍の体積を週に2回、4〜6週間測定して記録します。