0 閲覧数 • 3:52 分 • July 8th, 2025
卵アルブミン特異的受容体を発現するiPS細胞由来の制御性T細胞(Treg)を取ります。拘束されたマウスの尾静脈に注射します。
細胞は、膝関節包の内面を覆う滑膜に到達します。
次に、アジュバントで乳化したメチル化ウシ血清アルブミンまたはmBSAを投与します。
アジュバントは、MHC 分子を介してフラグメントを処理して提示する抗原提示細胞 (APC) への mBSA の提示を強化します。
APCはリンパ節に移動し、T細胞の活性化を誘導します。活性化されたT細胞は膝関節に移動します。
mBSA単独とオボアルブミンをそれぞれ左右の膝関節に注射します。
左膝では、APC は mBSA 断片を活性化された T 細胞に提示し、炎症誘発性サイトカイン放出を引き起こし、関節炎と呼ばれる組織損傷と関節腫れを引き起こします。
右膝では、Treg がオボアルブミンを提示する APC と相互作用し、抗炎症サイトカインを放出し、組織の損傷と関節の腫れを軽減し、それによって関節炎を改善します。
まず、目的の細胞培養物をトリプシンで分離し、各細胞型を10ミリリットルの新鮮な培地に再懸濁します。各細胞培養物を新しい10センチメートルの皿にプレートし、フィーダー細胞を細胞培養インキュベーターに接着させます。30分後、浮遊iPS細胞を収集し、培養物を個々の70ミクロンの細胞ストレーナーに通し、細胞クラスターを除去して計数します。
各培養物を1.5 x 107細胞/ミリリットル濃度で冷たいPBSに再懸濁し、必要に応じて再度ろ過します。次に、4〜6週齢の雌のC57BL6マウスを一度に1匹ずつ小動物拘束装置に入れ、マウス1匹あたり1種類の細胞200マイクロリットルを各動物の尾静脈に養子移します。
ダイヤルゲージノギスを使用して両膝の腫れを測定し、ベースライン測定値を確立します。細胞移植の10日後、1ミリリットルの注射器を使用して、各実験動物の尾の付け根にある完全なフロイントアジュバントで乳化した100マイクログラムのメチル化BSAをマウスに注射します。
細胞移植の17日後、10マイクロリットルのPBS中の20マイクログラムのメチル化BSAを左膝関節に、20マイクログラムのメチル化BSA、および10マイクロリットルのPBS中の100マイクログラムの全オボアルブミンを右膝関節に麻酔した各養子移管動物の関節内注射することにより、関節炎を誘発します。
関節炎を誘発してから 7 日後、膝を再度測定して膝の直径の増加率を計算し、膝蓋骨を外科的に切除します。ジョイントをホルマリンで固定します。次に、EDTAで脱灰した後、膝をパラフィンに埋め込み、組織化学的染色と分析のために4ミクロンの切片を取得します。