Alloimmune誘発血管拒絶反応を研究するためのマウス大動脈介在モデル

麻酔ドナーマウスを準備し、仰臥位に置きます。正中線を切開して腹腔を露出させます。

腸を外部化して、腎動脈の下に腎下腹部大動脈またはIAAを配置し、酸素を含んだ血液を運びます。

脱酸素化された血液を運ぶ隣接する下大静脈からIAAを分離します。

IAAの近くの小さな枝を結紮し、IAAをクランプして血流を妨げます。

適切な長さのセグメントを切除し、生理食塩水に入れます。

異なる遺伝的背景を持つレシピエントマウスで手順を繰り返します。

ドナーIAAをレシピエント内に埋め込み、その解剖学的向きに一致させます。

ドナー移植片の端をレシピエントの端に縫合することにより、エンドツーエンドの吻合を実行します。

クランプを解放し、漏れのない正常な血流を確認します。腸を腹腔に戻します。次に、切開部位を縫合します。

モデルは、移植されたIAA移植片に対する免疫応答を研究する準備が整いました。

、ドナーマウスを仰臥位に置き、手術顕微鏡の下で滅菌ドレープで包んだ清潔で薄いプレキシガラスボードの上に8〜30倍の倍率で

つま先をつまんで適切な外科的麻酔を確認した後、滅菌ハサミを使用して恥骨から剣状突起までの正中線を1回切開します。次に、小さなリトラクターを使用して腹壁を開き、腹腔を露出させます。次に、先端が無菌の綿のアプリケーターを使用して、腸を動物の左側の上側にそっと引っ込めます。生理食塩水で湿らせたガーゼで組織を覆い、生殖器官を下に移動して、腎下大動脈と下大静脈またはIVCを見つけます。

次に、医療番号 5 の鉗子を使用して、分岐部近くの左腎動脈で大動脈を IVC から分離します。次に、10-0 ポリアミド モノフィラメント縫合糸を使用して、大動脈近くの小さな枝を結紮します。ドナー大動脈とIVCが分離されたら、血管を生理食塩水で飽和させます。露出した空洞を湿らせたガーゼで覆い、ドナーを無菌エリアに置いておきます。

次に、レシピエントマウスを顕微鏡下に置き、先ほど示したようにレシピエント大動脈をIVCから分離します。次に、2 つの 4 ミリメートルの微小血管クランプを、関心のあるセグメントの近位と遠位に約 5 ミリメートル離して配置します。次に、Vannas-Tübingen顕微シミを使用して、単一の水平大動脈切開を行い、ドナー大動脈グラフトを収容するために腹部大動脈の0.5ミリメートル以下を切除します。

ドナーを顕微鏡に戻し、先ほど示したように3〜4ミリメートルのグラフトセグメントをトランセクトします。そうしたら。25ゲージの5/8針を使用して、針の先端が血管に接触しないように注意しながら、切除された大動脈をヘパリン化生理食塩水で洗い流し、氷上のヘパリン化生理食塩水の容器に血管を入れます。

切除後 30 分以内に、ドナー大動脈グラフトをレシピエントの同所性位置に配置し、それぞれの移植片の解剖学的方向をレシピエントの解剖学的方向と一致させます。次に、血管の外膜をそっとつかみ、5番の鉗子を使用してわずかに反転させます。次に、鉗子を使用して、10-0 ポリアミド モノフィラメント縫合糸に取り付けられた針を血管壁の全厚に打ち込み、ドナー大動脈グラフトをレシピエントの切除された血管に固定します。

連続ステッチを配置するには、移植片の上端と下端の両方に9時位置にステー縫合糸を配置します。次に、3時位置から移植片の上端から始めて、切除した端を2本の走行縫合糸で吻合し、縫合糸をステー縫合糸に固定します。次に、移植片を裏返し、血管の背側部分に縫合糸を続け、原点ステイ縫合糸に会います。血管に大きな圧力をかけずに縫合糸を固定し、下部吻合部の縫合を繰り返します。

吻合が完了したら、遠位微小血管クランプを解放して、血管を通る逆行性血流を可能にします。出血が観察されない場合は、近位クランプを解放します。血液閉塞が観察されない場合は、鉗子を使用してステー縫合糸の一端をそっとつかみ、血管を少し避けて血管の後壁を検査します。しわが見られません。ドナー血管とレシピエント血管の両方で激しい脈拍パターンが観察された場合は、綿の先端のアプリケーターを使用して腸を腹腔に戻します。

最後に、ニードルホルダーとGraefe鉗子を使用して、5-0ポリプロピレン縫合糸と連続ステッチで腹壁を閉じます。皮下閉鎖を使用して、同じ縫合糸で皮膚層を閉じます。後肢の運動機能を観察して、手術の成功を評価できます。