血管新生異所性脾臓移植のマウスモデル

脾臓移植のために麻酔をかけたレシピエントマウスを取ります。

正中線を切開して腹腔を露出させ、腸を変位させて脾臓を見つけます。

脾動脈と静脈を結紮して失血を最小限に抑え、脾臓を除去します。

腸を外部化し、生理食塩水に浸したガーゼを塗布して、露出した組織を湿らせた状態に保ちます。下大静脈(IVC)と隣接する腎下腹部大動脈(IAA)を見つけます。

IVCとIAAの枝を結紮します。血管をクランプして血流を遮断し、ドナーの脾臓を接続するための開口部を作ります。

ヘパリン化生理食塩水で血管を洗い流して血液を除去し、血栓の形成を防ぎます。

ドナーの脾臓を異所性に配置し、その動脈をIAA開口部に接続し、静脈をIVC開口部に接続します。

クランプを取り外して脾臓への血流を確保し、切開部を閉じます。

温かい生理食塩水を皮下注射してマウスに水分を補給し、その回復を監視します。マウスの生体脾臓免疫細胞を同定し、移植の成功を確認します。

ドナーの場合と同様に、手術領域が準備された後、正中線切開からレシピエント腹部に入り、脾静脈と動脈を結紮してレシピエントの本来の脾臓を除去します。37°Cに浸したガーゼで腸組織を覆い、慎重に腸を左側に動かします。

IVCの腎下大動脈の腰枝を解剖して結紮し、IVCの腎下大動脈を2つの4ミリリットル微小血管クランプでクロスクランプします。腎下大動脈に11-0ナイロン縫合糸を通し、血管を引っ込めてマイクロハサミで楕円形の大動脈切開術を作成できるようにします。

30ゲージの針を使用してIVCに穴を開けて楕円形の静脈切開を行い、開口部をドナー門脈の長さまで延長します。大動脈とIVCを500マイクロリットルのヘパリン化生理食塩水で洗い流して、血管から管腔内血液または血栓を取り除き、ドナー脾臓グラフトをレシピエント腹部の右脇腹に配置します。

ドナーの大動脈カフと門脈を注意深く識別します。血管がねじれていないことを確認した後、脾臓移植片を摂氏4度の生理食塩水に浸したガーゼで覆います。2本の11-0ナイロンステイ縫合糸を使用して、ドナー大動脈カフをレシピエント大動脈切開術の近位および遠位頂点に接続し、ドナー大動脈カフとレシピエント大動脈切開術の前壁の間に連続した11-0ナイロン縫合糸を2〜3バイトして吻合を行います。脾臓移植片をレシピエントの左側に向け、ドナー大動脈カフとレシピエント大動脈切開術の後壁との間に吻合を行います。

ドナー門脈とレシピエントIVCの間の静脈吻合を行い、両側に4〜5バイトの連続縫合糸を行います。最初に血管内腔内の後壁を縫合し、次に同じ縫合糸を使用して前壁を閉じます。IVCの外側の下隅に結び目を付けて吻合を完了します。

次に、血管クランプを解放し、滅菌綿棒を使用して脾臓の色が回復するまで出血をタンポナーデします。5-0合成吸収性ビクリル縫合糸で腹部