細菌性病原体に感染したex vivoヒツジブチ傷皮膚モデルの生成

子羊の額から得られた滅菌済みの皮膚生検切片を抗生物質を含まない培地で採取します。

このセクションは、外側の表皮とその下の真皮層で構成されています。

培地を取り除き、バッファーを使用して切片を洗浄します。

セクションに円形の切り込みを入れ、最上層を取り除きます。これによりバリアが破壊され、皮膚に創傷床が生成されます。

損傷した切片を、抗生物質を含まない培地を含むマルチウェルプレート内の透過性メンブレンインサートに移します。

病原菌の懸濁液を創傷床に導入し、インキュベートします。

インキュベーション中、創傷床は細菌の付着のための組織表面と細菌の増殖をサポートする栄養素を提供します。

これにより、細菌が創傷床全体に増殖して拡散し、感染が

確立されます。

皮膚サンプルに感染するには、400マイクロリットルの予熱した抗生物質を含まない培地で新鮮な24ウェルプレートを準備し、滅菌鉗子を使用して24ウェルインサートを追加します。皮膚サンプルから培地を取り出し、500マイクロリットルの滅菌PBSで洗浄し、洗浄液を取り除きます。

滅菌鉗子を使用して、サンプルをウェルの底にそっと保持します。4ミリメートルのパンチ生検を使用して、皮膚サンプルを1〜2ミリメートルの大まかな深さまで突き刺し、中央の創傷皮弁を作成します。次に、15番の刃メスと滅菌歯のAllis組織鉗子を使用して、創傷皮弁の最上層を取り除きます。

すべてのサンプルが傷ついたら、滅菌鉗子を使用してそれらを24ウェルインサートに移します。15マイクロリットルの細菌接種物を創傷床にピペットで入れてから、加湿した組織インキュベーターで摂氏37度で24時間インキュベートします。インキュベーション期間を長くするには、培地を取り出し、24時間ごとに新しい培地と交換し、同じ条件下でプレートをインキュベートします。