腫瘍スフェロイドにおける浸潤T細胞の三次元共培養モデル

アガロースキャストを含む培養プレートから始めます。キャストは、複数のマイクロウェルを備えた播種チャンバーで構成されています。

各マイクロウェルには、培地中に腫瘍スフェロイドが含まれています。スフェロイドは、腫瘍細胞の三次元凝集体です。

まず、アガロースキャストを囲む培地を取り除きます。次に、スフェロイドの損失を避けるために、播種チャンバーの一隅からキャスト内の培地を取り除きます。

腫瘍特異的T細胞の懸濁液を播種チャンバーに滴下導入し、細胞がスフェロイドを含むマイクロウェルに沈殿できるようにします。

次に、アガロースキャストの周囲に培地を加え、生理学的条件下でプレートをインキュベートして共培養

を開発します。

インキュベーション中、T細胞はスフェロイドを取り囲みます。T細胞のサブセットはスフェロイドに浸潤し、他の細胞は末梢に残り、3次元共培養モデルを確立します。

T細胞共培養をセットアップするには、ウェルあたり190マイクロリットルの適切なT細胞培養培地に適切な数のT細胞を再懸濁し、12ウェルプレートを傾けて、最初にアガロースキャストを取り囲む細胞培養培地を除去できるようにし、次に播種チャンバーで、スフェロイドを取り除くことはありません。

光学顕微鏡を使用してスフェロイドが吸引されているかどうかを確認し、P200を装填したピペットを各キャストの約1/2センチメートル上に持ち、スフェロイドを外さずに、滴状にT細胞を慎重にキャストに播種します。すべてのキャストが播種されたら、プレートを慎重に細胞培養インキュベーターに15分間戻してから、ウシ胎児血清を添加した新鮮な細胞培養培地を各キャストの外側に追加してさらに48時間インキュベートします。