免疫関連遺伝子のマウス皮膚組織への導入による免疫関連遺伝子の送達

サイトカインインターロイキン-15発現を欠く麻酔遺伝子組み換えマウスを調製します。

背側脇腹の皮膚を剃り、脱毛クリームを塗布して残っている毛幹を取り除き、その後のステップで皮膚への DNA 注入を改善します。

背側皮膚表面を滅菌し、DNA移植の標的領域に印を付けます。

インターロイキン-15をコードするプラスミドDNAの少量をマークされた表面に塗布します。

鍼の束を使用して、マークされた皮膚表面を繰り返し刺します。

針束の刺す動きは皮膚表面を穏やかに振動させ、最も外側の皮膚層の死んだ細胞を緩めます。

さらに、振動針は細胞の原形質膜をこすり、ケラチノサイトや樹状細胞を含む細胞への針灸、または鍼治療を介したDNA送達を促進します。

次に、マウスを回復させます。

皮膚のトランスフェクトに成功した細胞は、インターロイキン-15タンパク質を産生します。

マウスを麻酔した後、乾燥を防ぐために動物用眼科軟膏を目に塗ります。次に、動物の背中の皮膚を剃り、脱毛クリームを塗って残りの毛幹のケラチンタンパク質を溶解します。脱毛後、水に浸した綿でクリームを拭き取ります。

70% エタノールに浸した滅菌綿棒を使用して、皮膚の表面を消毒し、事前に準備したテンプレートでターゲットの皮膚領域に印を付けます。10マイクログラムのプラスミドDNAを含む10マイクロリットルのDNA溶液を目的の皮膚領域に塗布します。マウスを針灸するには、鍼治療器具を皮膚に対して垂直に持ち、30秒間にわたって、または皮膚に塗布された溶液が吸収されるまで、指定された表面を100回繰り返し穿刺します。

皮膚組織でプラスミドDNAの発現を成功させるには、皮膚の奥深くまで切り込まないようにし、DNA溶液が十分に吸収されていることを確認することが重要です。

手順が完了したら、針灸したマウスを加熱パッドの上に置き、麻酔から回復するまで体温を維持します。ネズミが十分な意識を取り戻したら、ケージに戻し、水と餌を与えます。処置後最初の 48 時間は、行動の変化、異常な外観などの不快感の症状がないかマウスを注意深く監視します。