インターロイキン-10欠損マウスにおける糞便微生物叢移植の影響の評価

腸の炎症を引き起こす抗炎症性サイトカインであるインターロイキン-10を欠く拘束されたマウスから始めます。

健康なマウスから、多様な腸内微生物が豊富な糞便懸濁液で満たされた注射器を取ります。

次に、注射器に口腔チューブを取り付けます。

このチューブを口に挿入し、マウスの胃まで下に導きます。

次に、糞便懸濁液を胃に直接投与し、徐々に結腸に到達させます。

結腸に入ると、糞便微生物は増殖してコロニーを形成し、腸内微生物を再確立します。

コロニー形成された微生物は、さまざまな二次代謝産物を放出します。

これらの代謝産物はムチンの生成を助け、結腸上皮を修復し、腸の完全性を回復します。

結腸上皮内では、糞便微生物とその代謝産物が免疫細胞と相互作用します。

この相互作用により、免疫細胞は抗炎症性サイトカインを放出し、インターロイキン 10 欠損マウスの結腸炎症の減少につながります。

生理食塩水に10%グリセロール溶液を加えて滅菌溶液を調製します。糞便ペレットのグラムごとに、この溶液を円錐形のチューブに10ミリリットル加えます。この混合物を低速で30秒間3回均質化し、ヒュームフード内の卓上ホモジナイザーを使用して糞便を再懸濁させます。2層の滅菌綿ガーゼで糞便懸濁液をろ過します。濾液を冷蔵庫に最大6時間一時的に保管するか、滅菌極低温バイアルに包装し、マイナス80度の冷凍庫に保管します。

標準的な手順に従って、ホモジナイザーまたはブレンダーを徹底的に洗浄します。凍結サンプルを使用する場合は、凍結した糞便懸濁液を氷上で解凍します。解凍した糞便懸濁液をボルテックスして混合します。新鮮または解凍した糞便懸濁液を1ミリリットルの注射器に移します。マウスの体重を量り、適切な強制経口針のサイズと最大投与量を選択します。

マウスの鼻の先から胸骨の底までの長さを測定して、強制経口針をテストします。生理食塩水または糞便懸濁液に10%グリセロールを注射器に充填し、注射器と針内の気泡を取り除きます。マウスケージを1つバイオセーフティキャビネットに入れ、プラスチック製のケージカバーを取り外し、金属製のラックを所定の位置に置いたままにします。

金属製のラックを片手で開きます。マウスの尻尾をつかみ、金属製のラックに置きます。片手でネズミの尻尾を持ち、もう片方の手の親指と中指を使って肩越しの皮膚をつかんで動物を拘束します。動物の頭をゆっくりと後ろに伸ばし、片手で頭を所定の位置に保持します。強制経口針を口の中の舌の上に置きます。

針が食道に到達するまで、上口蓋に沿ってゆっくりと進みます。針を一回の動きでスムーズに通します。針が正しく配置され、確認されたら、針に取り付けられた注射器を押してゆっくりと材料を投与します。投与後、針をそっと引き抜きます。マウスに印を付けて、ホームケージに戻します。呼吸困難や苦痛の兆候を探して、動物を5〜10分間監視します。糞便微生物叢移植後12〜24時間の間にマウスを再度監視します。