乳酸桿菌無細胞上清の抗がん効果評価法

結腸直腸癌スフェロイドを含むマルチウェルプレートを増殖培地に取ります。

ス

フェロイドは、生理学的腫瘍微小環境に似たがん細胞の三次元凝集体です。

増殖培地を取り出し、消化管の細菌であるラクトバチルス菌の培養物から得られた培養上清であるラクトバチルス無細胞上清(LCFS)の濃度を増加させます。

LCFSには細菌細胞がありませんが、細菌から分泌される抗がん活性を持つ活性代謝産物が含まれています。

LCFS の細菌代謝産物はスフェロイド内のがん細胞と相互作用し、アポトーシスを誘導し、細胞死につながります。

細胞への損傷は、スフェロイド形態の破壊をもたらします。

顕微鏡を使用して、LCFS処理されたスフェロイドを調べ、LCFSの濃度の増加に伴う細胞死の増加を観察し、細菌代謝産物の用量依存的な抗がん活性を示します。

LCFS処理の場合、調製した解凍したLCFSストック溶液を新鮮な増殖培地で25%、12.5、および6%の濃度に連続希釈し、200マイクロリットルのピペットを使用して、プレーティングされた結腸直腸癌細胞株培養の各ウェルからできるだけ多くの上清を慎重に除去します。

次に、200マイクロリットルのLCFSを添加した増殖培地をがん細胞の各セットに3回ずつ静かに加え、プレートをインキュベーターに戻してさらに24〜48時間放置します。