ヒト肝細胞と免疫細胞を用いたヒト化マウスモデルの開発

さまざまな免疫細胞を欠く麻酔をかけた免疫不全マウスから始めます。

このトランスジェニックマウスは、抗ウイルス薬と化学療法剤で前処理されています。抗ウイルス剤は、トランスジェニック肝細胞に存在するウイルスタンパク質と独占的に相互作用し、それらの除去を促進します。

一方、化学療法剤は骨髄内で活発に分裂している幹細胞を排除し、免疫細胞生成のためのニッチを作り出します。

マウスを解剖し、脾臓を露出させます。

ヒト肝細胞および造血幹前駆細胞またはHSPCの細胞懸濁液を取り、脾臓の下極に注入します。

注射部位の上の脾臓を結紮して、細胞を下極に制限し、マウス循環への侵入を容易にします。

切開部を閉じます。

注入された肝細胞は肝組織に到達し、マウスモデルでヒト肝細胞を確立します。

骨髄では、遊走したHSPCはさまざまなヒト免疫細胞に分化します。

これにより、ヒト肝細胞と免疫細胞を持つ二重ヒト化マウスモデルが開発されます。

まず、滅菌延長チューブの一方の端を 30 ゲージの針に取り付け、もう一方の端を 1 ミリリットルの注射器に取り付けます。シリンジにプールされたHEPとHSPCの懸濁液を満たします。シリンジを繰り返し分注ピペットのノッチに取り付け、各プレスで10マイクロリットルを分注するようにディスペンサーを調整します。テキストプロトコルに概説されているように各マウスを剃り、各マウスの体の左側を10%ポビドンヨードでこすり、続いて70%イソプロピルアルコールでこすります。

ヴァンナス型はさみを用いて、腹壁左側の皮膚、筋肉、腹膜を小さく切開し、胸郭下端から約5ミリ下の腹腔に入ります。脾臓の位置を確認し、鉗子を使用して手術領域に少し引っ張って簡単にアクセスできるようにし、30ゲージの針を脾臓の下部ポールに挿入します。

次に、分注ピペットのプランジャーのロックを解除し、脾臓あたり60〜80マイクロリットルを制限して、一度に10マイクロリットルの容量を分注します。針をゆっくりと引っ込め、結紮アプリを使用して結紮クリップで脾臓をクリップします。次に、滅菌PBSで濡らした綿の先端のアプリケーターを使用して、脾臓を体腔内に押し戻します。中断された縫合パターンを使用して、腹壁の筋肉層を閉じます。非吸収性縫合糸を使用した断続縫合パターンで皮膚の閉鎖を実現します。