ゼブラフィッシュ胚における緑膿菌感染に対するファージ療法

緑

膿菌感染にかかりやすい麻酔下の脱絨毛膜嚢胞性線維症ゼブラフィッシュ胚を取ります。

蛍光タンパク質を発現する緑膿菌を主要な血管であるキュビエ管に注入します。

注入された胚を培地と色素沈着遮断剤を含むプレートに移し、胚の色素沈着を阻害し、細菌を視覚化します。インキュベート。

注射された細菌は循環を通って移動し、臓器に侵入します。

それに反応して、宿主の免疫系が活性化され、炎症誘発性メディエーターが放出され、免疫細胞が動員されます。

インキュベーション後、緑膿菌に対する毒性ファージのカクテルをキュビエの管に注入し、胚を培地と色素沈着遮断剤を含むプレートに移します。

インキュベート。ファージは細菌に感染し、宿主機構を使用して新しいファージ粒子を生成します。

細菌が溶解し、隣接する細菌に感染するファージを放出し、炎症誘発性反応を低下させます。

蛍光顕微鏡を使用して、ゼブラフィッシュ胚の細菌蛍光の減少を経時的に観察し、緑膿菌に対するファージの有効性を示します。

受

精後26時間で、マイクロインジェクション針に約5マイクロリットルの緑膿菌接種物をロードし、キュビエ管の始点に針を背側に挿入し、そこで管が卵黄嚢全体に広がり始めます。1〜3ナノリットルのPAO1接種物を胚に注入し、体積が管内で直接膨張し、循環に入ることを確認します。

注射後、胚をフェニルチオ尿素を添加した新鮮なE3培地を含む2つの新しいペトリ皿の1つに移し、摂氏28度で30分または3時間インキュベートします。次に、マイクロインジェクション針に約5マイクロリットルのファージカクテルをロードし、針をマイクロインジェクターに固定します。次に、以前に細菌を注入した各胚のキュビエ管に1〜3ナノリットルのファージカクテルを注入し、摂氏28度でフェニルチオ尿素を添加した新鮮なE3培地を含む2つの新しいペトリ皿の1つに胚を入れます。