ワクチン接種を目的としたmRNAインロードナノ粒子の製剤化

正に帯電したポリマーを含む凍結ポリマー溶液から始めます。

ポリマー溶液を室温に達するまで解凍します。

均一に混合するためにバッファーとボルテックスを加え、均一な溶液を生成します。

最適な反応を得るために、ターゲットmRNAをポリマー溶液に等しい比率で導入します。

イン

キュベートして、正に帯電したポリマーが静電相互作用を介してmRNA内の負に帯電したリン酸基と相互作用できるようにします。

これにより、ポリマー構造内に mRNA が組み込まれやすくなり、mRNA-ポリマー複合体またはポリプレックスのナノ粒子が形成されます。

これらのポリプレックスをRNaseフリーの水を含むチューブに移します。

それらを混合し、ポリプレックスの沈殿させます。

スクロースを含む緩衝液を導入し、凍結します。スクロースは、ポリプレックスの構造的完全性を維持する凍結保護剤として機能します。

次に、フリーズドライを実行して、水の痕跡を取り除きます。

将来の使用のためにmRNAワクチン候補として低温で保存してください。

ポリプレックス形成のために、以前に調製したポリマーC-6ペプチドポリベータアミノエステルを解凍し、溶液をボルテックスします。ポリマー混合物を上下にピペッティングした後、酢酸ナトリウムで12.5ミリモル溶液を調製します。溶液をボルテックスし、10分間待ちます。

次に、mRNAを1ミリリットルあたり0.5ミリグラムで調製し、ピペッティングで混合します。ポリマー溶液を再び渦にします。次に、遺伝物質溶液をポリマー溶液に微量遠心チューブ内で1対1の比率で混合し、チューブをサーマルブロックで摂氏25度で30分間インキュベートします。インキュベーション後、水を含む微量遠心チューブにサンプルを加えて、1〜2個のRNaseフリーの水で混合物を沈殿させます。

次に、賦形剤を含めるために、mRNAとポリベータアミノエステルの混合物と同じ量で20ミリモルのHEPESと4%のスクロース溶液を加え、ピペッティングで混合します。凍結乾燥の場合、ポリプレックス溶液を摂氏マイナス80度で1時間凍結した後、一次乾燥を行い、再水和を避けるために直ちにポリプレックスを摂氏マイナス20度で保存します。