ジカウイルス増殖の強力な阻害剤としてのインターフェロンをスクリーニングするためのIn vitroアッセイ

ウイルス感受性上皮細胞単層を含むウェルを取ります。

テストウェルにテストインターフェロンの連続希釈液を追加します。コントロールウェルにはインターフェロンが欠

けています。

テストウェルでは、インターフェロンが細胞受容体に結合し、抗ウイルスタンパク質発現のシグナル伝達カスケードを引き起こします。

インキュベーション後、ジカウイルスをすべてのウェルに加えます。

ジカウイルスは宿主細胞受容体およびエンドサイトーシスと相互作用します。

次に、吸着されていないウイルスを削除します。コントロールウェルに培地を追加し、インターフェロンを追加した培地をテストウェルに追加します。

インキュベート。コントロールウェルでは、内在化されたウイルスが宿主細胞機構を使用して新しいウイルス粒子を形成します。

感染した細胞は溶解し、他の細胞に感染して溶解するウイルス粒子を放出し、細胞単層に透明な溶解ゾーンまたはプラークを形成します。

インターフェロン処理細胞では、抗ウイルスタンパク質がウイルスの複製と細胞溶解を阻害し、プラークの形成を防ぎます。

位相差顕微鏡を使用して、ウェル内のウイルスプラークをカウントします。

インターフェロン処理された井戸内のプラークの数が少ないということは、ジカウイルスに対するインターフェロンの抗ウイルス活性を示しています。

ナイーブベロ細胞を12ウェルプレートに播種してから6時間後、目的のサイトカインを指定された濃度で生物学的複製で添加します。処理の12時間後、ジカウイルス感染を実行し、感染のないネガティブコントロールウェルを含めます。感染の4時間後、ウイルス接種物をサイトカイン処理培地に置き換え、細胞を摂氏37度でさらに44時間インキュベートします。感染後48時間で、位相差顕微鏡を使用してウイルスプラークをカウントし、40倍の倍率で感染細胞の代表的な画像を取得します。