脳腫瘍細胞に対する免疫療法戦略としてのβ-グルカンの試験分析のためのアッセイ

ミクログリア単層を含むマルチウェルチャンバースライドを取ります。

テストウェルで、細胞をβ-グルカンでコーティングします。コントロールウェルにはβグルカンが欠けています。インキュベート。

試験井戸では、病原体関連分子パターンであるβ-グルカンがミクログリア上の特定の受容体に結合し、β-グルカン食作用を引き起こします。

これによりミクログリアが活性化され、反応性酸化剤やサイトカインなどの生理活性分子が生成され、培地中に放出されます。

ウェルから生理活性分子を含む培地を収集し、ろ過して破片とβグルカンを除去します。

生理活性分子の生物学的活性を維持するために、培地を低温で凍結します。

次に、培地を解凍し、脳腫瘍細胞の単層を含むマルチウェルチャンバースライドに加えます。インキュベート。

生理活性分子は細胞シグナル伝達経路を誘発し、がん細胞の増殖を減少させ、アポトーシスを誘導します。

がん細胞増殖の減少とアポトーシスの増加は、脳がん細胞に対するミクログリアの抗腫瘍特性を促進する薬剤としてβ-グルカンを示唆しています。

P. ostreatus、P. djamor、G. lucidum、およびH. erinaceusから単離された4つの異なるベータグルカンの0.2ミリリットル濃度でBV-2ミクログリア細胞を72時間コーティングすることにより、ミクログリアを活性化します。72時間後、ピペットで上清を回収し、残りの量を0.20マイクロメートルのシリンジフィルターに通します。次に、上清を摂氏-80度で少なくとも24時間凍結します。GL261を事前に活性化されたミクログリアコンディショニング培地で処理するには、250マイクロリットルのベータグルカン処理ミクログリア培地を80%コンフルエントGL261細胞に72時間加えます。