多電極アレイ上でのマウススパイラル神経節ニューロン外植片の培養

内耳の特殊な構造であるらせん神経節とコルチ器官を含む解剖されたマウス内耳セグメントから始めます。

コルチの器官には、聴覚信号の受容体として機能する有毛細胞が含まれています。

らせん神経節は、コルチ器官の有毛細胞を神経支配するプロセスを拡張するニューロン細胞体で構成されています。

らせん神経節をコルチの器官から分離し、そこから小さな組織切片または外植片を取得します。

次に、培地を含む細胞外マトリックスコーティングされた多電極アレイを取ります。

外植片をアレイ上に置き、コルチの器官を電極領域の外側に配置します。インキュベート。

外植片は、コーティングされた多電極表面に付着します。

血清タンパク質と成長因子を含む培地を定期的に追加します。

培養中、培地成分とコルチの器官は神経栄養サポートを提供し、多電極上のらせん神経節ニューロンからの神経突起の成長を促進します。

渦巻き神経節の基底部分とコルチの器官を鉗子で保持し、コルチの器官を基部から頂点までゆっくりと巻き戻すことにより、モディオラスのコルチの器官をらせん神経節から分離します。次に、鉗子または細かい顕微解剖はさみまたはナイフを使用して、らせん神経節から外側外植片を切り取ります。

次に、らせん神経節外植片とコルチ器官をMEAに移します。次に、SG外植片を電極領域とコルチ器官の上に、電極領域から約5ミリメートル離して配置します。組織への損傷を避けながら、外植片とコルチの器官をMEAに配置します。その後、MEAをインキュベーターに注意深く入れ、摂氏37度、CO₂ 5%で培養します。

翌日、外植片がMEAに付着しているかどうかを目視検査します。次に、10%FBSとBDNFを含む培地100マイクロリットルを毎日5日間連続して添加します。6日目に、10%FBSと5ナノグラム/ミリリットルBDNFを含む2ミリリットルの培地を加え、さらに13日間組織を培養します。