マウス脳から扁桃体領域を露出させる冠状脳スライスの生成

マウスの脳を氷のように冷たい緩衝液に取り、小脳を含む後部と内側前頭前野(mPFC)のある前部を取り除きます。

中央部分には、恐怖や不安などの感情を処理する扁桃体領域が含まれています。

脳セクションをろ紙上に移動して、余分なバッファーを取り除きます。

ステージに接着し、スライス中の寒天ブロックの動きを防ぐためにセクションの後ろに寒天ブロックを固定します。

このステージを、氷冷バッファーを備えたビブラトーム切断チャンバーに入れます。

切片を切断して、薄い冠状脳スライスを取得します。

これにより、扁桃体ニューロンと扁桃体の反応を調節するmPFCニューロンの突起との間のシナプス接続を含む扁桃体領域が露出します。

スライスを半分に切り、それぞれに扁桃体領域が含まれています。

次に、酸素を含んだ人工脳脊髄液を含む界面チャンバーに移します。

ニューロンの生存率を維持するために、生理学的温度でスライスを回収します。

脳を採取した後、メスを使用して小脳と脳の内部部分を切除し、以前と同様に氷冷の切断液で脳の中央部分を冷却します。脳をろ紙で吸い取り、ビブラトームステージに接着します。

繰り返しになりますが、スライス中の安定性を高めるために、脳の後ろに追加の寒天ブロックを固定します。摂氏4度の切断液で満たされた切断チャンバーにステージを取り付けた後、扁桃体を通して320ミクロンの冠状切片を切断します。それらを半分に切り、以前と同じようにインターフェースチャンバーにセクションを収集します。