新生児マウス脳からの混合グリア細胞培養物の取得

新生マウスの脳から始めて、タンパク質分解酵素溶液を含むチューブに移します。

酵素は組織の細胞外マトリックスを分解し、細胞解離を開始します。

消化された組織を増殖培地で繰り返し洗浄して酵素を除去します。

より大きな直径のピペットを使用して、ピペット内で組織を繰り返し移動させ、より小さな断片に解離させます。

次に、より小さな直径のピペットを使用して、断片を解離させ続け、細胞懸濁液を作成します。

この懸濁液をろ過して細胞の塊を除去し、初代ニューロンとミクログリアや星状細胞を含むグリア細胞の混合集団を含む単一細胞懸濁液を得る。

増殖培地を含む培養フラスコに細胞を播種し、インキュベートして接着を促進します。

時間が経つにつれて、培地中にニューロン成長因子が存在しないと、ニューロン死が引き起

使用済みメディアを新しいメディアと交換します。グリア細胞は栄養素を利用して増殖し、星状細胞とミクログリアの混合グリア培養を生成します。

を2ミリリットルの0.25%トリプシン-EDTAを含む50ミリリットルのチューブに移し、摂氏37度の水浴で15分間インキュベートします。培地を追加および除去することにより、新鮮な成長培地で脳を洗浄します。洗浄が完了したら、脳あたり2ミリリットルの成長培地を加え、脳を粉砕して均質化します。

脳組織が小さくならない場合は、開口部の小さいピペットに移行します。滴定の最後に、懸濁液が透明で塊が見えなくなったら、懸濁液を70ミクロンの細胞ストレーナーに通して単一細胞培養を作成します。

次に、8〜9ミリメートルの増殖培地をT75フラスコ(脳ごとに2つのフラスコ)にピペットで入れ、各フラスコに1ミリリットルの脳ホモジネートを加えます。16日目に単離するまで細胞を増殖させます。