イメージングマスサイトメトリーのための組織免疫染色

0 閲覧数3:33 • January 15th, 2026

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固定された組織サンプルを含むスライドガラスを抗原回収バッファーに入れ、加熱します。

温度の上昇とバッファーのアルカリ性pHは、固定誘導タンパク質架橋を切断し、抗原エピトープを露出させます。

スライドを冷却して熱による組織損傷を防ぎ、すすぎすぎて余分なバッファーを除去します。

疎水性バリアを適用し、スライドを湿度チャンバーに入れます。

透過処理遮断バッファーを追加します。バッファーの界面活性剤は細胞膜を透過性化し、ブロッキングタンパク質は非特異的結合部位をマスクしてバックグラウンド染色を減らします。

余分なバッファーを除去し、金属結合抗体カクテルを加え、インキュベートして抗体が特定の抗原に結合できるようにします。

スライドを洗浄し、結合していない抗体を除去します。

細胞に入り、DNAに結合する金属共役核染色剤を追加します。

余分な汚れを洗い流し、スライドを乾かします。

光学スキャナーを使用して、組織の構造的特徴の高解像度画像を取得し、染色サンプルのイメージングマスサイトメトリー分析からのデータの解釈に役立ちます。

免疫染色適合スライド上に取り付けられた5マイクロメートルの前処理組織切片から始めます。スライドをスライドメーラーに配置します。

熱誘起エピトープ回収またはHIERの場合は、組織が完全に浸されるまでスライドメーラーにHIERバッファーを追加します。スライドメーラーをクローキング解除チャンバーに入れ、加熱プログラムを開始します。

プログラム終了後、スライドメーラーを冷水を入れたトレイに入れ、冷まします。スライドを蒸留水で数回すすぎ、徐々に容量を増やします。

スライドメーラーからスライドを取り出し、余分なバッファーを拭き取ります。ブロッキングバッファーと抗体の損失を防ぐために、疎水性バリアペンを使用して組織を囲

みます。

スライドをカスタマイズされた湿度チャンバーで1時間インキュベートします。非特異的ブロッキングの場合は、湿度チャンバー内のスライドにブロッキングバッファーを追加します。インキュベーション期間が経過した後、余分なブロッキングバッファーを除去し、残りのバッファーを室温で自然乾燥させます。

抗体溶液を組織上に慎重に加え、摂氏4度の湿度チャンバーで一晩インキュベートします。

インキュベーション後、スライドをトリトン含有PBSで5分間洗浄します。最後に、スライドをPBSで5分間2回すすぎます。次に、組織をインターカレーター染料で処理し、室温の湿度チャンバーで30分間インキュベートします。

インキュベーション後、スライドをHPLCグレードの水で5分間洗浄し、デシケーターで30分間乾燥させます。

スライドが乾いたら、フラットベッドドキュメントスキャナーを使用して、1インチあたり1200ドット以上の解像度でスキャンします。

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最終更新:1 8月 2026