自動ワイヤの筋運動記録法を用いた腸間膜動脈の収縮と弛緩の研究

この手順では、人形の塩分感受性ラットと耐塩性ラットを使用して、フェニレフリン張力下での腸間膜抵抗性動脈の反応性を細胞外カルシウムと比較します。これは、最初に腸間膜アーケードを動物から分離し、抵抗動脈の枝を解剖することによって達成されます。次に。2本のステンレス鋼線のうちの1本目は、解剖された動脈の短い部分に通され、血管はグラフチャンバーに取り付けられます。

次に、2番目のステンレス鋼線が最初のワイヤーと平行に容器の内腔に通されます。次に、取り付けられた容器を正規化された内周に引き伸ばします。手順の最後のステップは、フェニレフリンを繰り返し適用して血管に挑戦し、カルシウムの累積的な適用で血管をリラックスさせることにより、血管を再活性化することです。

最終的に、結果は血管内の張力の変化を示し、これをカルシウム応答曲線に変換してEC 50値を決定するために使用できます。比較のために。この方法を使用するというアイデアを最初に思いついたのは、ラットのMasonaryバッテリーのnevネットワークがgpro銅カルシウム感知受容体を発現していることを発見したときでした。

これは、アゴニストによって活性化される苦いAIC受容体と同じ方法で研究することができます。一般に、この方法に不慣れな人は、内皮層と平滑筋層が小さいため、苦労する可能性があります。血管は傷つきやすいです。

これが発生すると、これらの容器の機械的特性が損なわれる可能性があります。まず、作業エリアと手術器具を準備します。麻酔をかけた動物を背中に置き、腹部をアルコールで拭きます。

正中線開腹術を行った後、はさみを使用して、上腸間膜動脈を含む約85センチの腸を切除します。近位端をピロリの近くに、遠位端を回盲接合部の近くで切断します。切除した切片を、生理的塩溶液またはPSSを含むコーティングされたペトリ皿に室温で入れます。.

腸の近位端を右に固定し、腸の残りの部分を反時計回りに固定します。次に、枝2と3を含む腸間膜動脈の一部と、近位端から腸の一部を解剖します。腸間膜動脈のV字型の分岐点を特定し、静脈から離剖します。

鉗子を使用して脂肪と結合組織を優しく引き離し、動脈に直接接触しないようにします。容器の取り付けを開始するには、長さ約2ミリメートルの2つの動脈セグメントを切断します。4センチメートル40マイクロメートルのタングステンフリーステンレス鋼線の先端を使用して、動脈の内腔を開くことができます。

次に、細い鉗子を使用して、ワイヤーを各動脈の内腔に挿入します。内皮を傷つけないように注意しながら、筋グラフトチャンバーをPSSで摂氏37度で満たします。鉗子を使用して、ねじ山付き血管セグメントをチャンバーに移します。

次に、切除した近位血管セグメントをミオグラフチャンバーに移し、ワイヤーに沿って端を引っ張って血管に供給します。容器を伸ばさないでください。マイクロメータに接続された右側の顎の近くの固定ネジの下に、ワイヤーの近端を反時計回り

鉗子でワイヤーの自由端をつかみ、右顎の遠い固定ネジの下に時計回りに固定し、ワイヤーに沿った血管セグメントが顎自体と接触することなく顎の間の隙間にあることを確認します。顎をねじ込みます。2本目のワイヤーを容器と平行に合わせ、ルーメンの遠端に挿入します。

すでに取り付けられているワイヤーをガイドとして使用して、1回の動きで血管セグメントの内腔にワイヤーをそっと通します。操作中にワイヤーが伸びないように、また内皮に触れないように、ワイヤーを血管から約1センチ離してください。ジョーをねじ込み、2本目の取り付けワイヤーが右手に固定された1本目のワイヤーの下に動くことを確認します。

ジョーは、トランスデューサーに接続された左側のジョーの近くの固定ネジの下に、2番目のワイヤーの近端を時計回りに固定します。ワイヤーの遠端を左ジョーの固定ネジの下に固定し、締めてワイヤーを伸ばします。取り付けが完了したら、摂氏37度で平衡化するために30分間待ちます。

平衡化後、モーターは取り付けメニューからリセットされ、血管を正規化された内周に引き伸ばす正規化手順が開始されます。まず、正規化メニューを開き、目標経壁圧を13.3キロパスカルに設定します。次に、各正規化ステップの期間を 60 秒に設定します。

IC の 1 と IC 100 の比率は 0.9 に等しく、IP キャリブレーションは 2 つのスター デルタに設定する必要があります。ヘアラインが血管セグメントの遠方とニューロンの上にあるときに、顕微鏡の接眼レンズの読み取り値を使用して、取り付けられた腸間膜動脈の長さを測定します。正常化後、血管は、一連の刺激とウォッシュアウト期間からなる標準的な開始を行うことにより再活性化されます。

まず、myoチャンバーカバーを交換し、95%の空気と5%の二酸化炭素で曝気を開始します。100マイクロモルのアスコルビン酸を含む新鮮なPSSをチャンバーに充填します。5マイクロモルのフェンネル、リン、またはPEで容器を5分間収縮させ、PSSバッファーで4回洗浄します 最後の洗浄後、チャンバーにPSSを補充し、3分間待ってからチャンバーにPSSを補充し、前に示した PE.As で収縮すると、動脈は実験の準備が整いました。

収縮した血管の弛緩を測定するには、濃度の塩化カルシウムを累積的に添加します。この表は、フェニレフリン適用後の基礎張力が、wistar DSまたはドールソルト感受性とDRまたはドールソルト耐性ラットの間で異なることを示しています。.このWistarラットからのトレースは、DSラットの組織で深刻な損なわれたカルシウム弛緩の累積追加によるPE収縮動脈の弛緩を示しています Wistarラットと比較し、ここで見られるようにDr.Ratsと比較すると、カルシウム感度の違いはカルシウム反応曲線で見ることができ、EC 50値を計算するときにも見られます。

最後に、DSラットは、Dr.Ratsが習得すると、動脈内のカルシウム感知受容体の発現が減少することを示しています。この手法は、適切に実行すれば2時間で実行できます。このビデオを見た後、等尺性条件下でsmall me腸内アトリの血管反応性を外因性化合物と比較する方法をよく理解できるはずです。