マウス海馬-内膜皮質スライスにおける局所電界電位の記録

マウス海馬-嗅内皮質スライスを水中記録チャンバーに固定します。

酸素化されたACSFを一定の温度で連続的に流し、組織の生存率を維持します。

嗅

内皮質から情報を受け取るニューロンを含む海馬CA3領域の放射層内に電解質溶液で満たされた刺激ピペットを配置します。

ACSFを充填した記録ピペットを、CA3からの軸索突起を持つシナプスを形成するニューロンからなるCA1領域の錐体層に挿入します。

刺激ピペットを使用して、電気パルスを印加してシナプス前CA3ニューロンの活動電位をトリガーします。

活動電位は、シナプス後CA1ニューロンの受容体に結合する神経伝達物質の放出を誘導します。結合によりイオン流入が誘導され、膜電位の変化が起こります。

局所電界電位またはLFPと呼ばれる、複数のシナプス後CA1ニューロンの膜電位の複合変化は、記録ピペットによって細胞外に記録されます。

局所電界電位を記録するには、400ミリリットルのビーカーにカルボゲンバブルACSFを入れ、ポンプチューブの一端をビーカーに入れます。毎分8〜10ミリリットルの蠕動ポンプをオンにして、400ミリリットルのビーカーから加熱されたリザーバーに、そしてリザーバーから摂氏32度の記録チャンバーにACSFを導きます。

次に、チューブを短時間クランプし、ポンプをオフにして流れを一時停止します。細い鉗子を使用して、組織が置かれているレンズペーパーの角で脳組織スライスを記録チャンバーに移し、スライスします。レンズペーパーを剥がし、スライスを記録チャンバーに沈めたままにし、ハープを使用してスライスを固定します。

手動マイクロマニピュレーターを使用して、塩化ナトリウムを充填した刺激ピペットの先端を30〜45度の角度でスライスの表面にゆっくりと進めます。次に、2番目のマイクロマニピュレーターを使用して、ACSFを充填した局所電界電位ピペットの先端を30〜45度の角度で関心領域にゆっくりと前進させ、標準プロトコルに従ってサンプルの局所電界電位を記録します。