Name: マウス全胚培養における神経管閉鎖 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-10-21T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 37 s
Description: 学ぶマウス全胚培養法による神経管閉鎖の観察と薬理学的操作。体外環境で神経軸の伸長と閉鎖過程を詳細に解析し、神経管閉鎖不全の分子メカニズム解明に貢献する。

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我々は、解剖や文化技術と有用なアドバイスのためにA. Hadjantonakis（スローンケタリング研究所）の研究室とL. Niswander（コロラ​​ド - デンバーのU）の研究室に感謝します。この作品は、L. NiswanderとJ.ナドー（システム生物学研究所）と共同でMERにJDGとRO1NS05897にNRSA NS059562によってサポートされています。

1。培地の調製 - すべての試薬を表1に記載されています<ol><li> 37雄ラットの血清を融解℃を</li><li> 55℃30分間熱不活性化するラットの血清° C </li><li>室温で5分のための10Kでの遠心ラットの血清</li><li>上清を除去し、フェノールレッドを含まないDMEM W /高グルコースで50:50を混ぜる</li><li> 0.45 UMシリンジフィルターを使用してメディアを滅菌</li><li>メディア/胚の少なくとも1ミリリットルを用意する必要があります</li></ol> 2。妊娠ダムから子宮の単離<ol><li>動物実験および使用委員会（IACUC）によって承認された手順を使用して、妊娠中のダムは最初の麻酔ですし、頚椎脱臼により屠殺</li><li> 70パーセントエタノールで腹部を消毒する</li><li>大規模な鉗子で、ちょうど乳首のラインの上に、正中線に沿って皮膚の小さなパスをつまんで、大きなハサミを使って鉗子の下に腹部を開きます。任意の内部構造を傷つけないように注意してくださいの</li><li>腹部全体が開いているように、マウスの各側に向かって最初の開口部から横方向にカットするあなたのはさみを使用して、 </li><li>腸と余分な脂肪パッドはしばしば子宮を隠蔽したりすることができますし、これらは、子宮と卵巣の上部は両側に観察できるように脇に移動する必要があります</li><li>卵巣下子宮の上部をつまんで、他の卵巣に子宮の一方の端からカット、脂肪から子宮を分離するためにあなたのはさみを使用して</li><li>生理食塩水とペトリ皿の中であなたの鉗子と場所と子宮を持ち上げ</li></ol> 3。子宮から胚の除去<ol><li>余分な血液を除去し、外から余分な脂肪をトリミングする生理食塩水で子宮をすすぐ</li><li>室温で清潔な皿に移す。可視化を改善するために生理食塩水Tyrodes </li><li>実体顕微鏡を使用して、慎重に離れて子宮の皮に小さなハサミまたは必要に応じて細かい場合（＃5）鉗子のいずれかを使用してそれぞれの胚を区切ります。 </li> &lt;LI&gt;胚ではないピアスに注意して、子宮壁と脱落膜と背面皮子宮壁との間の空間に微細な鉗子を挿入</ol> 4。胚からの脱落膜の除去<ol><li>オリエント暗い部分（胎盤）はあなたから離れて手前にして脱落膜</li><li>あまりにも深く切らないように注意しながら、軽い部分から脱落膜の暗い部分を分ける線に沿って鉗子で切開を加えます</li><li>栄養膜の円錐（EPC）を引き裂くように注意しながら、卵黄嚢の上から胎盤の分離を完了。この時点で、卵黄嚢にReicherts膜を可視化することができるはずです</li><li>ではないピアス卵黄嚢に注意して全体の脱落膜の（軽い部分）を削除し続けます</li><li>そっとつまみ、EPCから、それを離れて剥離によってReichertsを削除します。 EPCが損傷したり、卵黄嚢から分離されている場合は、胚はE8.5 - E9.5から正常にオンに失敗します。 </li><li reicherts></ol> 5。文化システムのセットアップ<ol><li>胚の卵黄嚢に損傷を与えることなくピペッティングすることができるように、開口部の直径を大きくするハサミでプラスチック製トランスファーピペットの先端をカット</li><li>胚あたりのメディアの1 mlのクリーンローラーボトルを埋める。 3月6日胚の最大が使用されてのローラーボトルの種類に応じて、それぞれのボトルにロードすることができます。 </li><li>できるだけ少ないTyrodesとして繰り越し、メディア充填ローラーボトルに、カットのピペットを用いて胚のようにメディアを希薄化しないように転送する</li><li>ガラスのローラーボトルの上部にゴム製のプラグ（栓）を添付する</li><li>タイトなシールがプラグとドラムの間に形成されるようにローラー培養ドラムにローラーボトルを挿入</li><li>一度、すべてのボトルが添付されており、ドラム内の任意の空のスロットは、wを封印されているi番目のゴム製ストッパー、ローラーを活性化</li><li> CO 2とO 2タンクを開き、出口弁1秒に泡を放出されるように、約2 psiにそれらを調整する。 E8.5 - E10胚の場合、20％O 2および5％CO 2を使用する必要があります。 </li><li>インキュベーターを37に設定されていることを確認℃、覆ったり、胚を光から遮蔽されるようにインキュベーターを閉じる。 </li><li>胚はsomitiesのほか、回転の進行、および神経管の閉鎖の程度によって、その発展を評価するために定期的に点検してください</li><li>文化の中で2〜3時間後に、薬理学的阻害剤または他の治療は、培地に添加することができます</li><li>研究デザインは、車両や研究試薬の不活性類似体などのコントロールを含める必要があります。 </li></ol> 6。全胚培養の後に開発を評価する<ol><li>ガスの電源をオフにし、ローラーを停止し、インキュベーターからボトルを取り外し</li><li>タイロードに戻す胚を転送する実体顕微鏡下で評価のためのペトリ皿の中のsまたはPBS </li><li>卵黄嚢は、風船のようなハートビートが見えるはずと心拍数が&gt; 120分あたりの拍数、および流通が明らかでなければならないはず表示されます</li><li>必要に応じて、卵黄嚢除去の前に写真の胚</li><li> EPCの近くに穴を切削し、胚の頭部と臀部を介して卵黄嚢と羊膜を反転させる胚から卵黄嚢を削除します。 </li><li>臍帯は、胚から卵黄嚢を分離するためにカットすることができます、と卵黄嚢は、必要に応じて胚を遺伝子型に使用することができます。 </li><li>体節の数と、オープン頭蓋ひだのような神経管欠損、顔面及び/またはオープン尾側神経孔の不完全閉鎖のための胚を調べます。胚は（複数の形態形成変化のタイラーの分類に応じてステージングできます<a href="http://genex.hgu.mrc.ac.uk/Databases/Anatomy/MAstaging.html">遊んで住む/ home.htmlのをhttp://www.emouseatlas.org/~~V</a> 、アゲイン）の写真記録を胚の開発に便利です。 </li></ol> 7。ノート<ol><li>どんなニックネームや卵黄嚢に涙が成功した転換を防ぎ、正常な発達を阻害するので、高品質の解剖は、不可欠です。 EPCは、ライヒェルトの膜（RM）の除去中に損傷することができる、とEPCが部分的にでも卵黄嚢から分離されている場合、胚は正常に発育しません。しかし、RMの不完全な除去胚は、および/またはRMセルを一緒に固執する原因となるには正常な発達を妨げるような、どちらも、文化に生い茂ると卵黄嚢の拡張を収縮させることができる。 </li><li>鈍いや曲がり鉗子の手順が著しく困難になるため、クリーンでシャープな鉗子は、良好な解剖を取得するための秘密です。楽器の蛋白質の堆積物は、組織の損傷につながる。 </li><li>クリーン、無菌ガラスびんはまた、側壁に付着し、損傷から胚を防ぐために不可欠です。実験を開始する前に、ボトルには、SCRにする必要があります、石鹸と水でubbedのdH 2 Oで洗浄し、水の沸騰するまで、各ボトルに少量の水でマイクロ波処理。瓶は、その後70％エタノールでリンスし、空気乾燥を許可されます。 </li><li>早く胚を培養培地に転送することができる、37に戻っ° Cより良い生存を暖めているため、可能な限り迅速に動作する。 </li><li>それぞれの胚が胚の成長の矛盾の発生を防ぐために、同じ時間、室温になるようにローラーボトルに、任意の胚を転送する前に全体のゴミを解剖完了</li><li>文化の細菌汚染を防ぐために無菌環境を維持する。私たちの培養実験は、抗生物質なしで行われますが、多くのラボでは、細菌の増殖を防ぐために、彼らのメディアへの抗生物質に追加されています。それは実験開始時だったので培地は実験終了時に明確に表示されます。メディアが白濁しているか、目に見える沈殿物がある場合は、CONがある可能性がありますあなたの文化に感染しているtamination。 </li><li>効果のないガス交換には、胚の発達を遅らせるので、連続的な配信を保証する信頼性の高いレギュレータを持っていることを確認することができます。 </li><li>胚は、ex vivoでの培養で約50％遅く、開発、従ってそれはあなたが実験の完了のための開発の適切な段階に達していることを保証するために体節を数えるために不可欠です。 </li></ol> 8。代表的な結果： 胚の出現前後のローラーの培養は、図1に図示されています。解剖の時に、胚は尾が頭のひだの背後にあるあらゆる手段を設定した（図1A、D）で指定する必要があります。文化の36時間後、胚は、彼らは尾は頭部の前面（図1Bを、C、E、F）になっているC -カーブ、胎児の位置、になるように回し完了しておく必要があります。 RhoAのキナーゼ阻害剤（Y - 27632）、中に収斂伸長の既知の阻害剤と薬理学的操作神経胚形成（Ybot -ゴンザレス、2007）、それらの吻側 - 尾側軸に沿った胚の短縮の結果（図1E、F）および頭蓋神経襞閉鎖を阻害する。私たちのデータは、Y - 27632の増量は徐々に頭蓋倍クロージャを損なう（図2A）と下流型RhoAは頭蓋神経胚形成と収斂伸長におけるシグナル伝達の役割と一致して体の軸（図2B）を、短縮することを示している。 <img alt="図1" src="/files/ftp_upload/3132/3132fig1.jpg"> 図1。薬理学的阻害剤Y - 27632と文化の胚と操作の外観。前の全胚培養へのE8.5で（、D）ディテールに秘められた胚（B、E）ローラーの文化の36hrsに続いて、まだそのまま卵黄嚢とE10での胚。 （C、F）卵黄嚢が成功した転機と神経管閉鎖を説明するために削除されています。 Rhoキナーゼ阻害剤Y - 27632（E、F）で処理した胚は、適切な収斂伸長を受け、説明するために失敗しました。短縮体軸。 <img alt="図2" src="/files/ftp_upload/3132/3132fig2.jpg"> 図2。頭部神経管閉鎖と軸の伸長に対するRhoAのキナーゼ阻害剤の効果。 （A）その頭蓋ひだ（％NTC =パーセンテージ神経管閉鎖）を正常に閉じることができた胚の割合は、培養培地に添加Y - 27632の投与量と比較されます。 （B）耳胞と前肢の間の距離が大幅にY - 27632の増量（P &lt;0.05）で減少した。

<ol><li>Cockroft, D. L. Dissection and culture of post implantation embryos. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCockroft%2C+DL+%22Mammalian+Postimplantation+Embryos+A+Practical+Approach%22">Mammalian Postimplantation Embryos A Practical Approach</a>. Copp, A. J., Cockroft, D. L. , IRL Press. Oxford. (1990).</li>
<li>Gray, J. D., Ross, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanistic+insights+into+folate+supplementation+from+Crooked+tail+and+other+NTD-prone+mutant+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Birth+Defects+Res.+A.+Clin.+Mol.+Teratol%22%5BJournal%5D)">Mechanistic insights into folate supplementation from Crooked tail and other NTD-prone mutant mice.</a> Birth Defects Res. A. Clin. Mol. Teratol. 85, 314-321 (2009).</li>
<li>Kaufman, M. H. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKaufman%2C+MH+%22The+Atlas+of+Mouse+Development%22">The Atlas of Mouse Development</a>. , Academic Press Limited. San Diego. (1992).</li>
<li>Ybot-Gonzalez, P., Savery, D., Gerrelli, D., Signore, M., Mitchell, C. E., Faux, C. H., Greene, N. D., Copp, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Convergent+extension%2C+planar-cell-polarity+signalling+and+initiation+of+mouse+neural+tube+closure%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Convergent extension, planar-cell-polarity signalling and initiation of mouse neural tube closure.</a> Development. 134, 789-799 (2007).</li>
<li>Ross, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene-environment+interactions%2C+folate+metabolism+and+the+embryonic+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Wiley+Interdiscip+Rev+Syst+Biol+Med%22%5BJournal%5D)">Gene-environment interactions, folate metabolism and the embryonic nervous system.</a> Wiley Interdiscip Rev Syst Biol Med. 2, 471-480 (2010).</li>
</ol>

利害の衝突は宣言されません。

その開発中に胚に固有なものから母体、子宮内の要因を分離する能力は、胚発生の全段階を研究するための重要なツールです。ここでは、それによって薬剤の母体の代謝の変数を削除し、頭蓋神経胚形成の元の子宮内でのRhoAのキナーゼの小分子阻害剤の効果を分析した。この薬理学的操作では、頭蓋神経胚形成と収斂伸長に大きな影響を与える。この化合物に対する感受性が異なる遺伝的変異マウスの間で比較することができます。ここで紹介する方法は、試薬のさまざまな方法を使って胚の細胞機能を直接操作できるように、開発中の他の分子経路の研究にも適用できます。

<table border="1"><tbody><tr><th>の名前</th><th>会社</th><th>カタログ番号</th><th>コメント</th></tr><tr><td>解剖用実体顕微鏡</td><td>ライカ</td><td> M165 </td><td></td></tr><tr><td>精密インキュベータ</td><td> BTCエンジニアリング（英国） </td><td> BTC 001 </td><td></td></tr><tr><td>回転ボトルの文化のユニット</td><td> BTC </td><td> BTC 003 </td><td></td></tr><tr><td>ユニットを回転させるためのガラスびん</td><td> BTC </td><td> BTC 005 </td><td></td></tr><tr><td>シリコーンゴム栓</td><td> BTC </td><td> BTC 007 </td><td></td></tr><tr><td>シリコーンゴムのコルク</td><td> BTC </td><td> BTC 008 </td><td></td></tr><tr><td>ガスバブラーの入口</td><td> BTC </td><td> BTC 012 </td><td></td></tr><tr><td>ガスバブラーの入口トラップ</td><td> BTC </td><td> BTC 013 </td><td></td></tr><tr><td>ガスバブラーアウトレット</td><td> BTC </td><td> BTC 014 </td><td></td></tr><tr><td>ガスボンベ</td><td> TechAir </td><td></td><td> 20％O 2、CO 2 5％ </td></tr><tr><td>ガスレギュレータ</td><td> TechAir </td><td></td><td></td></tr><tr><td>雄のラット血清</td><td>ハーラン研究所</td><td> 4520 </td><td></td></tr><tr><td> DMEM W / Oフェノールレッド</td><td>インビトロジェン</td><td> 31053 </td><td></td></tr><tr><td> 10mLのシリンジ</td><td> BD </td><td> 309604 </td><td></td></tr><tr><td>シリンジフィルタ</td><td> Nalgene </td><td> 190-2545 </td><td></td></tr><tr><td>大解剖ハサミ（ブラント先端） </td><td> VWR </td><td> 82027-594 </td><td></td></tr><tr><td>エクストラファインボンはさみ</td><td>ファイン科学ツール（FST） </td><td> 14084〜08 </td><td></td></tr><tr><tD&gt; Dumot＃5鉗子</td><td> FST </td><td> 11252〜50 </td><td></td></tr><tr><td>タイロードの生理食塩水</td><td></td><td></td><td>コックロフト1990年に記載のように</td></tr><tr><td> 10センチメートル使い捨てシャーレ</td><td> BD </td><td> 351029 </td><td></td></tr></tbody></table>

マウス全胚培養における神経管閉鎖

Neural Tube Closure in Mouse Whole Embryo Culture

遺伝的マウスモデルでは、哺乳類の神経管閉鎖の研究において重要なツールです（グレー＆ロス、2009;ロス、2010）。しかし、 子宮内でマウスの胚の研究は、直接薬理学的に興味のある試薬で母体の代謝の影響から分離して胚を操作するために私達の無力によって制限されます。食事を介して、または注射により、小分子、組換えタンパク質、またはsiRNA、母親へのこれらの物質の配信を使用するかどうかは、それらが胚に達するのを妨げる可能性のある身体の防御の様々なこれらの不安定な化合物を加えないでしょう。全体の胚の培養物における調査は、開発上の本質的な胎児の影響から母体を分離するのに使用できます。 ここでは、郭清後の通常の神経管閉鎖（クロケット、1990）を可能にするローラーインキュベーター装置で高濃縮媒体を用いて培養マウス胚のための手法を提案する。かつて文化の中で、胚ができます胚が子宮内に残っていた場合以外の場合は不可能なインビトロ技術で 、従来使用して操作する。胚の兄弟は、E7 - 7.5（神経板の形成、神経胚形成の開始直前に）から頭蓋倍と尾側神経孔の終了時E9.5 - 10（に発生、神経胚形成の異なる側面を研究するために種々の時点で収集することができます閉鎖、カウフマン、1992）。このプロトコルでは、我々は、頭蓋神経胚形成の研究に最適なタイムポイントで胚を解剖ための私達の方法を示しています。胚は、神経管閉鎖の開始後、前の胚の転換と頭部神経倍閉鎖へ、E8.5（約10〜12 somities）で解剖し、E10（26-28 somities）まで培養によって維持されるときに頭蓋神経胚形成が完了されるはずです。

母体の代謝をバイパスする神経胚形成の間にマウス胚の直接の薬理学的操作を可能にする方法が記載されている。技術は時間のポイントと薬剤を変えることによって、神経胚形成の異なる側面を研究するために適応させることができます。

遺伝子改変マウスモデルは、哺乳類の神経管閉鎖の研究における重要なツールである（Gray & Ross, 2009; Ross, 2010）。しかしながら、マウスの研究において……

この手順の全体的な目的は、条件を定義可能な子宮外環境において、マウス胚の神経軸の伸長および神経管閉鎖に至る一連のイベントを観察することです。まず、妊娠8.5日（胚齢8.5日）の麻酔下にある妊娠マウスから子宮角を摘出します。次に、個々のマウス胚を、卵黄嚢と大部分の脱落膜を維持したまま子宮から取り出します。次に、胚外脱落膜組織を切り取り、外胎盤円錐をそのまま残します。手順の最終ステップとして、卵黄嚢に入った胚を、試験対象の薬理剤を含むか含まない培地が入ったローラーボトルに移し、連続ガス供給設備を備えたインキュベーター内で18から24時間培養します。最終的に、体節の漸次的な増加、神経襞の接合、そして胚が胎児特有のC字型に屈曲しながら閉鎖する様子を示す結果を得ることができます。本手法は、正常な神経管閉鎖にどのような分子経路が関与しているかなど、この分野における重要な疑問に答えるのに役立ちます。また、特に神経管欠損症（NTD）を誘発する遺伝子変異を持つ胚において、正常な神経管形成を促進するためにどのような薬剤やサプリメントが有効であるかを解明できます。解剖の手順は非常に困難であるため、この技術を視覚的に提示することが極めて重要です。胚は小さく損傷しやすいため、卵黄嚢が損傷すると、体軸の回転や循環器系の発達が損なわれ、成功率が低下する可能性があります。まず、雄ラット血清を37°Cで解凍し、培地を調製します。次に、ラット血清を55°Cで30分間不活化させます。次に、10,000 RPMで5分間遠心分離します。室温で上清を取り除き、高グルコースでフェノールレッドフリーのDMEMと1:1の比率で混合します。0.45 µmのシリンジフィルターを用いて培地を滅菌します。子宮を摘出し、生理食塩水を入れたシャーレに置いて胚を取り出します。まず、子宮を生理食塩水で洗浄して過剰な血液を取り除き、外側の不要な脂肪を切り取ります。その後、ステージ上で手を固定し、実体顕微鏡下での視認性を高めるため、室温のTyro生理食塩水を入れた清潔なシャーレに子宮を移します。小型のハサミまたは微小鑷子（ピンセット）を用いて子宮を剥離し、各胚を分離します。子宮壁と脱落膜の間に微小鑷子を挿入し、卵黄嚢を破裂させないよう最小限の張力で子宮壁を剥がします。次に、胎盤が自分とは反対側を向くように脱落膜の向きを調整します。次に、ピンセットを用いて、脱落膜の暗色部と明色部を分けるように、ラインに沿って切開します。この際、深く切りすぎないように注意してください。その後、胎盤と卵嚢の上部を完全に分離させます。外胎盤円錐（EPC）を破かないように注意します。この時点で、卵黄嚢上のリッカー膜が見えるはずです。卵黄嚢からリッカー膜を取り除く作業は、この手順の中で最も困難な部分であり、忍耐と安定した手つきが求められます。下層の卵黄嚢を損傷させずにリカーを慎重に除去するため、脱落膜全体をさらに取り除きます。卵黄嚢を突き刺さないように注意しながら、リカー膜を軽くつまみ、EPCから剥がすようにして除去してください。EPCが損傷したり卵黄嚢から分離したりすると、胚はE 8.5からE 9.5にかけて正常に回転できなくなります。リッカー膜を除去すると、胚が卵嚢を通して容易に観察できるはずです。耳胞の下から始まり、尾端までの一方の側にある体節を数えて胚のステージを判定します。卵嚢を傷つけずに胚を操作するため、プラスチック製転送ピペットの先端をカットして使用します。清潔なローラーボトルに、胚1個あたり1 mLの培地を満たします。使用するローラーボトルの種類に応じて、1本あたり最大3〜6個の胚を導入できます。カットしたピペットを用いて、胚を培地を満たしたローラーボトルに移行させます。この際、培地が希釈されないよう、Tyrode液の持ち込みを最小限に抑えてください。ガラス製ローラーボトル上部にゴム栓を取り付けます。プラグとドラムの間が密閉されるように、ローラーボトルをローラー培養ドラムに挿入します。すべてのボトルを取り付けたら、ドラムの空きスロットをゴムストッパーで封止します。次に、ローラーを起動します。続いて、プレミックスCO2 O2タンクを開き、出口バルブから1秒間に1回の気泡が出るように、約2 PSIに調整します。E 8.5およびE 10胚の場合、20%O2および5%CO2を使用してください。インキュベーターを37 °Cに設定し、胚が遮光されるようにカバーをかけるか扉を閉めます。胚の発育を評価するため、体節の形成、回転の進行、および神経管閉鎖の程度を定期的に確認します。培養開始から2〜3時間後、必要に応じて薬理学的阻害剤やその他の処理を加えます。インキュベーションが完了したら、ガスを遮断し、ローラーを停止させ、インキュベーターからボトルを取り出します。胚をペトリ皿に入れたtyrosまたはPBSに戻します。実体顕微鏡下で、卵黄嚢が風船のように膨らみ、心拍が確認でき、血流が見えるはずです。EPCの近くに切り込みを入れ、卵黄嚢と羊膜を胚の頭部と臀部の方へ反転させることで、胚から卵黄嚢を取り除きます。臍帯を切り、卵黄嚢を胚から分離させます。最後に、胚に形態異常や、頭蓋褶曲の開口、顔面の閉鎖不全、あるいは後神経孔の開口などの神経管欠損がないかを確認します。胚は、多数の形態形成上の変化に基づくTyler分類に従ってステージ分けが可能です。ローラー培養前後の胚の形態を、解剖時の状態でここに示します。胚は、尾側が頭側褶曲の後方に位置する、反転していない状態でなければなりません。培養から24時間後、胚はターンを完了し、尾が頭部の前方に位置するC字型の胎児様姿勢になっているはずです。この画像の上段は、阻害剤を添加していない胚の発達を示しています。下段は、神経管閉鎖中の収束伸長（convergent extension）の阻害剤として知られているROCK（Rhoファミリーキナーゼ）阻害剤Y 2 76 32を用いた薬理学的操作による影響を示しています。この阻害剤は、尾側軸に沿った胚の短縮を引き起こし、頭側の神経褶孔の閉鎖を阻害します。我々のデータは、Y 2 7 6 3 2の投与量を増やすことで、頭側褶孔の閉鎖が段階的に損なわれ、体軸が短縮することを示しており、これは頭側神経および収束伸展における下流のrow Aシグナリングの役割と一致しています。この解剖技術を習得すれば、6〜12個の胚からなる1腹の胚について、60分から90分で完了させることができます。このビデオを視聴することで、システムレベルで発生メカニズムを研究することを目的とした、妊娠8.5日から10日のマウス胚の培養に必要な手順について、十分に理解することができます。

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