アルツハイマー病モデルのためのアミロイドベータタンパク質の脳定位直接注入

頭蓋骨が露出した麻酔をかけたマウスから始めます。マウスは、凝集しやすいアミロイドベータタンパク質があらかじめ充填された注射器を含む定位固定フレームに固定されます。

タンパク質注入座標を決定するための重要な基準点であるブレグマに印を付けます。

注射器を動かし、ブレグマに触れ、次にラムダに触れて背腹座標を決定し、正確な針の深さを確保します。

シリンジを所定の内側外側座標より上に移動し、記憶処理に重要な歯状回をターゲットにします。

頭蓋骨の表面に触れ、背腹座標が制限内にあることを確認し、マークを付けます。反対側でもこの手順を繰り返します。

マークされた内側外側座標にドリルで穴を開け、アミロイドベータタンパク質を歯状回に注入し、逆流を防ぐために保持します。

ミロイドベータタンパク質を反対側にドリルで穴あけして注入し、タンパク質を均一に分散させます。

イヤーバーをマウスから取り外し、切開部を縫合します。

時間が経つにつれて、アミロイドベータタンパク質が凝集して歯状回ニューロンを分解し、記憶処理を混乱させるプラークを形成し、アルツハイマー病を引き起こします。

スで頭皮の正中線を2〜3ミリ切開します。まっすぐな細いハサミを使用して切開線を約1.0センチメートルに延長し、頭蓋骨の矢状縫合糸、ブレグマ、ラムダを露出させます。その後、鉗子を使って皮膚を引き離します。

滅菌生理食塩水を染み込ませた滅菌綿棒で頭蓋骨を洗浄します。次に、清潔で乾いた綿棒を使用して頭蓋骨を乾かします。次に、ブレグマに点を付けます。マイクロマニピュレーターを使用してハミルトンシリンジを、針の先端がブレグマのドットにちょうど触れるように配置します。次に、DV 座標を記録します。

ラムダポイントにドットをマークします。シリンジをラムダ点まで後方に動かして、頭蓋骨のAP軸が水平であることを確認します。針の先端は、ブレグマポイントと同様にラムダポイントに触れる必要があります。その後、DV位置を記録します。ブレグマとラムダの DV 座標は 0.5 ミリメートル以内である必要があります。

次に、針先をブレグマドットに戻します。開始 AP 位置を記録します。次に、開始AP座標から2ミリメートルを引いて終了AP位置を計算し、シリンジ針を最終AP座標に再配置します。

次に、現在のML座標を記録します。開始 ML 座標に 1.3 ミリメートルを加算または減算して、左右の終了 ML 座標を計算し、シリンジ針を終了 ML 座標に移動します。両端のML座標で針先を頭蓋骨の表面に接触させ、DV座標が0.5ミリメートル以内であることを確認します。

最後のML座標で、針を頭蓋骨の上で0.5〜1センチメートル引き上げます。頭蓋骨に暗い色の極細なポイントマーカーで点をマークします。頭蓋骨の反対側に対してこの手順を繰り返します。次に、注射器を遠ざけます。

0.8 ミリメートルのドリルビットを使用して、頭蓋骨の左右の ML 座標に穴を開けます。反対側に対してもこの手順を繰り返します。その後、シリンジを新しく導入された穴の1つに移動します。針を頭蓋骨のすぐそばまで下げ、脳に穴を開けないように注意してください。

針が頭蓋骨を通過したことを確認するには、針を頭蓋骨にそっと押し付けて、針が穴から出ないようにします。次に、開始DV座標を記録します。開始 DV 座標から 2.2 ミリメートルを引いて終了 DV 座標を計算し、針を終了 DV 座標まで下げます。

次に、定位固定インジェクターポンプを設定して、4マイクロリットルのAβ_1-42を毎分0.5マイクロリットルの速度で歯状回に注入します。注入後、注射部位からの溶液の逆流を最小限に抑えるために、針をさらに 1 分間所定の位置に置いてください。その後、針を脳の反対側に移動し、手順を繰り返します。

次に、イヤーバーのネジを緩めます。学生標準パターン鉗子を使用して頭皮を引っ張って閉じ、縫合糸で傷を塞ぎます。ノーズガードを外し、マウスを取り外します。