神経ペプチド受容体アゴニストを用いた後根神経節感覚ニューロンの刺激

トランスフェクトされたラット後根神経節感覚ニューロンを含むマルチウェルプレートを取ります。

テストウェルニューロンは神経ペプチド受容体発現の低下を示しますが、コントロールウェルニューロンは生理学的レベルの神経ペプチド受容体発現を示します。

培地を無血清培地に交換して、正確な刺激反応のための制御された環境を提供します。

神経ペプチド受容体アゴニストをウェルに加えて混合します。プレートをインキュベートします。

コントロールウェルでは、神経ペプチド受容体アゴニストが標的受容体に結合し、神経伝達物質を放出する細胞内シグナル伝達カスケードを引き起こします。

しかし、テストウェルでは、神経ペプチド受容体の発現が減少するとアゴニストの結合が制限され、対照と比較して神経伝達物質の放出が減少します。

インキュベーション後、ウェルと遠心分離機から培地を回収します。

上清をチューブに移し、適切な免疫測定法を使用して神経伝達物質レベルを測定します。対照サンプルは、神経受容体アゴニスト刺激後の試験サンプルよりも高い神経伝達物質の放出を示します。

6日目、プレーティング後、siRNAトランスフェクションの72時間後に、培地を200マイクロリットルの無血清培地に変更します。30分間のインキュベーション後、1マイクロリットルの刺激化学物質を加え、ピペッティングで穏やかに混合します。必要な期間インキュベートした後、培養皿から培地を回収し、5,000倍gで摂氏4度で5分間遠心分離して、浮遊不純物を除去します。遠心分離から上清を回収し、必要に応じてリン酸緩衝生理食塩水で希釈します。