マウス脳組織の凍結破砕標本における神経膜タンパク質の免疫標識

マウス脳組織の凍結骨折標本をバッファーに収

めます。

試験片は、表面のディテールを強化するためにプラチナでコーティングされ、構造の安定性を高めるためにカーボンでコーティングされています。

界面活性剤を含む消化バッファーを入れたバイアルに検体を移します。

組織の分解を促進するためにインキュベートし、コーティングに埋め込まれた膜とタンパク質を無傷のままにします。

バッファーで洗ってゴミを取り除きます。

非特異的抗体結合を防ぐためにブロッキング溶液を追加します。

標的神経膜タンパク質に特異的な一次抗体を導入します。

バッファーで洗浄して、結合していない抗体を除去します。

一次抗体に結合する金結合二次抗体とインキュベートします。

バッファーで洗浄して余分な抗体を除去します。

顕微鏡検査中に塩分が残るのを防ぐために、水ですすいでください。

透過型電子顕微鏡またはTEMグリッドに試料を取り付けます。

TEMの下で、黒い点として現れる金粒子によって識別される標的ニューロン膜タンパク質を視覚化します。

SDS消化の場合は、レプリカを1ミリリットルのSDS消化バッファーで満たされた4ミリリットルのガラスバイアルに移します。摂氏80度で振って18時間消化させます。免疫標識のために、レプリカを新鮮なSDS消化バッファーで10分間洗浄します。次に、2%BSA TBSで希釈した一次抗体および二次抗体とともに、摂氏15度の湿ったチャンバー内で24〜72時間インキュベートします。

その後、formvar コーティングされた 100 行の平行棒グリッドにレプリカを取り付けます。透過型電子顕微鏡でレプリカを80または100キロボルトで画像化します。次に、CCDカメラでデジタル画像を取得します。