ヒト末梢血からの多血小板血漿の調製

円錐形のチューブ内のヒト末梢血から始めます。

チューブを低速で遠心分離して、血液を下部の赤血球、中央のバフィーコート、上部の血小板含有血漿の3つの層に分離します。

血漿層を新しいチューブに移し、高速で遠心分離して血小板をペレット化します。

血漿上清を新しいチューブに移します。

血小板ペレットを収集し、適切な量の血漿上清で再構成して、高濃度の血小板を含む多血小板血漿またはPRPを取得します。

まず、抗凝固血液を含む遠心分離チューブを、無菌環境内の室温に設定された臨床グレードの卓上遠心分離機に入れます。最初のソフトスピンを100gで15分間実行して、抗凝固血液を3つの層に分離します:下の赤血球、上の血漿、中央のバフィーコート。

18ゲージの滅菌脊髄針を使用して、三層サンプルから血漿の最上層を無菌方法でピペットで移動させます。血漿を別々の円錐形の底部遠心分離チューブに集め、各チューブに 10 ミリリットルの血漿が保持されるようにします。

次に、それぞれ10ミリリットルの血漿を含む15ミリリットルの遠心分離チューブを遠心分離機に入れます。1,600 gで20分間ハードスピン遠心分離を行い、チューブの底にある血小板をペレット化します。上清を別々のチューブに集めます。

次に、18 ゲージの滅菌脊髄針を使用して、血小板ペレットを 5 ミリリットルの注射器にピペットで入れます。異なるチューブからすべての血小板ペレットを 1 つの 5 ミリリットル注射器に集めて適用します。

その後、臨床使用のために、2回目の遠心分離から必要な量の上清血漿で収集したペレットを再構成します。臨床グレードの血球計算盤または自動血液分析装置を使用して、最終的なPRPサンプル中の血小板をカウントします。絶対血小板数、血小板濃度勾配、および血小板回収効率は、これらの式を使用して計算されます。