トランスフェクションされた初代マウス大脳皮質細胞のタイムラプスイメージング

前

駆細胞や神経細胞などのマウス胚の初代大脳皮質細胞を含むポリマーコーティングされたマルチウェルプレートを取ります。前駆細胞をトランスフェクトして、標識と追跡のために蛍光タンパク質を発現させます。

プレートを倒立蛍光顕微鏡の予熱したインキュベーションチャンバーに移し、安定したイメージング環境を実現します。

プレート上の基準位置を見つけて、一貫したイメージング位置

を確保します。トランス

フェクトされた細胞を観察する可能性を最大限に高めるために、より高い倍率でウェルごとに複数のイメージングフィールドを選択します。

一定の間隔で、位相差画像を同時にキャプチャして細胞の形態とダイナミクスを明らかにし、蛍光画像を同時にキャプチャして蛍光タンパク質の発現を監視します。

タイムラプス位相差画像と蛍光画像を比較して、前駆細胞の分裂と神経系統への分化を追跡します。

レトロウイルス形質導入細胞を画像化するには、温度および二酸化炭素コントローラーに接続されたイメージングチャンバーに組織培養プレートを置き、細胞を摂氏37度、二酸化炭素5%の一定の条件に維持します。

XY 軸でゼロ点として機能する位置を選択し、ゼロ点をキャリブレーションします。ウェルごとに10〜15の位置を選択して、10倍の倍率で画像化します。光毒性を低減するために、位相差画像を5分ごとに取得し、蛍光画像を3時間ごとに取得するようにソフトウェアを設定します。温度の平衡化中に焦点が変化する可能性があるため、実験の最初の3時間は焦点を確認して調整してください。