JoVE 実験百科事典
神経科学
0 回視聴 • 2:57 分 • June 18th, 2025
神経変性プリオン病に関連するタンパク質であるプリオンタンパク質の発現を抑制する小さな干渉RNAから始めます。
カチオン性リポソーム懸濁液を追加します。
負に帯電したsiRNAは、正に帯電したリポソーム表面に結合します。
ポリアルギニンの尾部に結合した狂犬病ウイルス糖タンパク質であるRVG-9rペプチドを導入します。
アルギニン残基は、RVG-9r-siRNA結合を促進します。
リポソーム-siRNA-ペプチド複合体を麻酔マウスの尾静脈に注入します。
LSPC は血流を循環して脳に到達します。
RVG-9rペプチドは、内皮細胞上のニコチン性アセチルコリン受容体に結合し、血液脳関門を横切って受容体を介したトランスサイトーシスを引き起こします。
脳内では、RVG-9r はニューロンのアセチルコリン受容体に結合し、LSPC エンドサイトーシスと siRNA 放出を促進します。
RNA誘導サイレンシング複合体はsiRNAに結合します。
パッセンジャー鎖は解離し、ガイド鎖はPrP mRNAに結合して切断し、翻訳を妨げ、PrP発現を減少させます。
20マイクロリットルの4ナノモルリポソーム懸濁液を200マイクロリットルの20マイクロモルストックsiRNA溶液に加え、室温で10分間インキュベートします。次に、RVG-9r標的ペプチドの500マイクロモルストック80マイクロリットルをsiRNAリポソーム溶液に加え、室温で10分間インキュベートします。
酸素中の2〜3%イソフルオランを用いてマウスを麻酔した後、マウスの眼を眼科用軟膏で覆い、つま先をつまんで麻酔を確認する。反応がない場合にのみ続行してください。麻酔を維持しながら、マウスを仰向けまたは横向きに置いて尾静脈にアクセスします。
尾部を 70% エタノールで拭き取り、26 ゲージのインスリン注射器を使用して 300 マイクロリットルの LSPC または PALETS を尾部静脈に注入します。遠位への注射を開始し、静脈が崩壊または破裂した場合は近位に移動します。マウスが胸骨の横臥位を維持するまで、マウスを清潔なケージに入れます。