脊髄および眼球筋萎縮症マウスモデルにおける組換えアデノ随伴ベクターの注入

束された脊髄および眼球筋萎縮症またはSBMAに罹患したマウスから始めます。

尾をきれいにし、温めて静脈を拡張します。

SBMA は、変異した AR mRNA を産生する変異したアンドロゲン受容体または AR 遺伝子によって引き起こされます。

このmRNAは、信号伝達を損ない、筋力低下を引き起こす運動ニューロンで有毒なタンパク質を合成します。

次に、治療用マイクロRNAをコードするプラスミドを含む組換えアデノ随伴ウイルスまたはAAVベクターを含むシリンジを取ります。

尾静脈に針を挿入し、溶液を注入します。

次に、圧力をかけて出血を止め、マウスをケージに戻します。

ウイルスベクターは循環すると、筋肉機能を制御する運動ニューロンに到達します。

ウイルスはエンドサイトーシスを介して細胞に侵入し、プラスミドを放出します。

プラスミドは、変異体AR mRNAに相補的な配列を持つ成熟マイクロRNAを産生します。

これらのマイクロRNAはAR mRNAに結合し、分解を引き起こします。

これは有毒なタンパク質の蓄積を抑制し、神経筋機能の改善に役立ちます。

AAVマイクロRNAプラスミドストックを100〜200マイクロリットルのアリコートに分割し、1ミリリットルあたり10〜100兆ゲノムのウイルス量を含みます。次に、1つのアリコートを注射器にロードし、27〜30ゲージの針を取り付けます。

次に、標準のマウス拘束具を使用して、尻尾を露出させたマウスを固定します。次に、尾を70%アルコールできれいにし、暖かいパッドを尾の下に約30秒間置き、血管拡張を高めます。次に、尾の遠位部分で、斜角を上にして、約15度の浅い角度で尾静脈に針を挿入します。

次に、ウイルスを注入し、数秒待ってから針を抜きます。針を抜いた後、2本の指で適度な圧力をかけて出血を止めます。その後、動物をホームケージに戻します。