JoVE 実験百科事典
神経科学
0 回視聴 • 2:44 分 • August 7th, 2025
束された脊髄および眼球筋萎縮症またはSBMAに罹患したマウスから始めます。
尾をきれいにし、温めて静脈を拡張します。
SBMA は、変異した AR mRNA を産生する変異したアンドロゲン受容体または AR 遺伝子によって引き起こされます。
このmRNAは、信号伝達を損ない、筋力低下を引き起こす運動ニューロンで有毒なタンパク質を合成します。
次に、治療用マイクロRNAをコードするプラスミドを含む組換えアデノ随伴ウイルスまたはAAVベクターを含むシリンジを取ります。
尾静脈に針を挿入し、溶液を注入します。
次に、圧力をかけて出血を止め、マウスをケージに戻します。
ウイルスベクターは循環すると、筋肉機能を制御する運動ニューロンに到達します。
ウイルスはエンドサイトーシスを介して細胞に侵入し、プラスミドを放出します。
プラスミドは、変異体AR mRNAに相補的な配列を持つ成熟マイクロRNAを産生します。
これらのマイクロRNAはAR mRNAに結合し、分解を引き起こします。
これは有毒なタンパク質の蓄積を抑制し、神経筋機能の改善に役立ちます。
AAVマイクロRNAプラスミドストックを100〜200マイクロリットルのアリコートに分割し、1ミリリットルあたり10〜100兆ゲノムのウイルス量を含みます。次に、1つのアリコートを注射器にロードし、27〜30ゲージの針を取り付けます。
次に、標準のマウス拘束具を使用して、尻尾を露出させたマウスを固定します。次に、尾を70%アルコールできれいにし、暖かいパッドを尾の下に約30秒間置き、血管拡張を高めます。次に、尾の遠位部分で、斜角を上にして、約15度の浅い角度で尾静脈に針を挿入します。
次に、ウイルスを注入し、数秒待ってから針を抜きます。針を抜いた後、2本の指で適度な圧力をかけて出血を止めます。その後、動物をホームケージに戻します。