Name: パーキンソン病の単方向、病変6-OHDAモデルマウスの開発 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-02-14T12:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 9 s
Description: 学ぶ、マウスにおける片側6-OHDA病変手術によるパーキンソン病モデルの作製法。前脳内側束への神経毒素投与で95%以上のドーパミン枯渇を達成し、低死亡率で行動実験に適した動物モデルを提供する。

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この作品は、外務国際貿易（カナダ政府）、トロント大学のコンノート·ファンド、イノベーション、NSERC、Krembil財団と硬化、パーキンソンの信頼のためのカナダの財団の部門によってサポートされていました。

<ol><li>Costall, B., Naylor, R. J., Pycock, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-specific+supersensitivity+of+striatal+dopamine+receptors+after+6-hydroxydopamine+lesion+of+the+nigrostriatal+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Non-specific supersensitivity of striatal dopamine receptors after 6-hydroxydopamine lesion of the nigrostriatal pathway.</a> Eur. J. Pharmacol. 35, 276-283 (1976).</li>
<li>Maneuf, Y. P., Mitchell, I. J., Crossman, A. R., Brotchie, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+role+of+enkephalin+cotransmission+in+the+GABAergic+striatal+efferents+to+the+globus+pallidus%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">On the role of enkephalin cotransmission in the GABAergic striatal efferents to the globus pallidus.</a> Exp. Neurol. 125, 65-71 (1994).</li>
<li>Robertson, G. S., Robertson, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+that+L-dopa-induced+rotational+behavior+is+dependent+on+both+striatal+and+nigral+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Evidence that L-dopa-induced rotational behavior is dependent on both striatal and nigral mechanisms.</a> J. Neurosci. 9, 3326-3331 (1989).</li>
<li>Ungerstedt, U., Arbuthnott, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+recording+of+rotational+behavior+in+rats+after+6-hydroxy-dopamine+lesions+of+the+nigrostriatal+dopamine+system%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Quantitative recording of rotational behavior in rats after 6-hydroxy-dopamine lesions of the nigrostriatal dopamine system.</a> Brain Res. 24, 485-493 (1970).</li>
<li>Brotchie, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+approaches+to+the+symptomatic+treatment+of+parkinsonian+syndromes%3A+alternatives+and+adjuncts+to+dopamine-replacement%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Novel approaches to the symptomatic treatment of parkinsonian syndromes: alternatives and adjuncts to dopamine-replacement.</a> Curr. Opin. Neurol. 10, 340-345 (1997).</li>
<li>Besson, M. J., Graybiel, A. M., Nastuk, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%5B3H%5DSCH+23390+binding+to+D1+dopamine+receptors+in+the+basal+ganglia+of+the+cat+and+primate%3A+delineation+of+striosomal+compartments+and+pallidal+and+nigral+subdivisions%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">[3H]SCH 23390 binding to D1 dopamine receptors in the basal ganglia of the cat and primate: delineation of striosomal compartments and pallidal and nigral subdivisions.</a> Neuroscience. 26, 101-119 (1988).</li>
<li>Gerfen, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((D1+and+D2+dopamine+receptor-regulated+gene+expression+of+striatonigral+and+striatopallidal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">D1 and D2 dopamine receptor-regulated gene expression of striatonigral and striatopallidal neurons.</a> Science. 250, 1429-1432 (1990).</li>
<li>Schiffmann, S. N., Jacobs, O., Vanderhaeghen, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Striatal+restricted+adenosine+A2+receptor+%28RDC8%29+is+expressed+by+enkephalin+but+not+by+substance+P+neurons%3A+an+in+situ+hybridization+histochemistry+study%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Striatal restricted adenosine A2 receptor (RDC8) is expressed by enkephalin but not by substance P neurons: an in situ hybridization histochemistry study.</a> J. Neurochem. 57, 1062-1067 (1991).</li>
<li>Hutchison, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+neuronal+activity+in+segments+of+globus+pallidus+in+Parkinson%27s+disease+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Differential neuronal activity in segments of globus pallidus in Parkinson's disease patients.</a> Neuroreport. 5, 1533-1537 (1994).</li>
<li>Pan, H. S., Penney, J. B., Young, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gamma-aminobutyric+acid+and+benzodiazepine+receptor+changes+induced+by+unilateral+6-hydroxydopamine+lesions+of+the+medial+forebrain+bundle%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Gamma-aminobutyric acid and benzodiazepine receptor changes induced by unilateral 6-hydroxydopamine lesions of the medial forebrain bundle.</a> J. Neurochem. 45, 1396-1404 (1985).</li>
<li>Pan, H. S., Walters, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unilateral+lesion+of+the+nigrostriatal+pathway+decreases+the+firing+rate+and+alters+the+firing+pattern+of+globus+pallidus+neurons+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Synapse%22%5BJournal%5D)">Unilateral lesion of the nigrostriatal pathway decreases the firing rate and alters the firing pattern of globus pallidus neurons in the rat.</a> Synapse. 2, 650-656 (1988).</li>
<li>Gong, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+gene+expression+atlas+of+the+central+nervous+system+based+on+bacterial+artificial+chromosomes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A gene expression atlas of the central nervous system based on bacterial artificial chromosomes.</a> Nature. 425, 917-925 (2003).</li>
<li>Kreitzer, A. C., Malenka, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endocannabinoid-mediated+rescue+of+striatal+LTD+and+motor+deficits+in+Parkinson%27s+disease+models%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Endocannabinoid-mediated rescue of striatal LTD and motor deficits in Parkinson's disease models.</a> Nature. 445, 643-647 (2007).</li>
<li>Shen, W., Flajolet, M., Greengard, P., Surmeier, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dichotomous+dopaminergic+control+of+striatal+synaptic+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Dichotomous dopaminergic control of striatal synaptic plasticity.</a> Science. 321, 848-851 (2008).</li>
<li>Lundblad, M., Picconi, B., Lindgren, H., Cenci, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+of+L-DOPA-induced+dyskinesia+in+6-hydroxydopamine+lesioned+mice%3A+relation+to+motor+and+cellular+parameters+of+nigrostriatal+function%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol.+Dis%22%5BJournal%5D)">A model of L-DOPA-induced dyskinesia in 6-hydroxydopamine lesioned mice: relation to motor and cellular parameters of nigrostriatal function.</a> Neurobiol. Dis. 16, 110-123 (2004).</li>
<li>Grealish, S., Mattsson, B., Draxler, P., Bjorklund, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterisation+of+behavioural+and+neurodegenerative+changes+induced+by+intranigral+6-hydroxydopamine+lesions+in+a+mouse+model+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Characterisation of behavioural and neurodegenerative changes induced by intranigral 6-hydroxydopamine lesions in a mouse model of Parkinson's disease.</a> Eur. J. Neurosci. 31, 2266-2278 (2010).</li>
<li>Dauer, W., Przedborski, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parkinson%27s+disease%3A+mechanisms+and+models%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Parkinson's disease: mechanisms and models.</a> Neuron. 39, 889-909 (2003).</li>
<li>Francardo, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+the+lesion+procedure+on+the+profiles+of+motor+impairment+and+molecular+responsiveness+to+L-DOPA+in+the+6-hydroxydopamine+mouse+model+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol.+Dis%22%5BJournal%5D)">Impact of the lesion procedure on the profiles of motor impairment and molecular responsiveness to L-DOPA in the 6-hydroxydopamine mouse model of Parkinson's disease.</a> Neurobiol. Dis. 42, 327-340 (2011).</li>
<li>Jakowec, M. W., Petzinger, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((1-methyl-4-phenyl-1%2C2%2C3%2C6-tetrahydropyridine-lesioned+model+of+parkinson%27s+disease%2C+with+emphasis+on+mice+and+nonhuman+primates%5BTitle%5D)+AND+%22Comp.+Med%22%5BJournal%5D)">1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine-lesioned model of parkinson's disease, with emphasis on mice and nonhuman primates.</a> Comp. Med. 54, 497-513 (2004).</li>
<li>Visanji, N. P., Brotchie, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MPTP-Induced+Models+of+Parkinson%27s+Disease+in+Mice+and+Non-Human+Primates%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Protoc.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">MPTP-Induced Models of Parkinson's Disease in Mice and Non-Human Primates.</a> Curr. Protoc. Pharmacol. Chapter 5, 42-42 (2005).</li>
<li>Sedelis, M., Schwarting, R. K., Huston, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+phenotyping+of+the+MPTP+mouse+model+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Behavioral phenotyping of the MPTP mouse model of Parkinson's disease.</a> Behav. Brain Res. 125, 109-125 (2001).</li>
<li>Schallert, T., Fleming, S. M., Leasure, J. L., Tillerson, J. L., Bland, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CNS+plasticity+and+assessment+of+forelimb+sensorimotor+outcome+in+unilateral+rat+models+of+stroke%2C+cortical+ablation%2C+parkinsonism+and+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">CNS plasticity and assessment of forelimb sensorimotor outcome in unilateral rat models of stroke, cortical ablation, parkinsonism and spinal cord injury.</a> Neuropharmacology. 39, 777-787 (2000).</li>
<li>Paul, M. L., Currie, R. W., Robertson, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Priming+of+a+D1+dopamine+receptor+behavioural+response+is+dissociated+from+striatal+immediate-early+gene+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Priming of a D1 dopamine receptor behavioural response is dissociated from striatal immediate-early gene activity.</a> Neuroscience. 66, 347-359 (1995).</li>
<li>Breese, G. R., Traylor, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+6-hydroxydopamine+on+brain+norepinephrine+and+dopamine+evidence+for+selective+degeneration+of+catecholamine+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharmacol+Exp.+Ther%22%5BJournal%5D)">Effect of 6-hydroxydopamine on brain norepinephrine and dopamine evidence for selective degeneration of catecholamine neurons.</a> J. Pharmacol Exp. Ther. 174, 413-420 (1970).</li>
<li>Breese, G. R., Chase, T. N., Kopin, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolism+of+tyramine-3H+and+octopamine-3H+by+rat+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Metabolism of tyramine-3H and octopamine-3H by rat brain.</a> Biochem. Pharmacol. 18, 863-869 (1969).</li>
<li>Frankin, K. B. J., Paxinos, G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFrankin%2C+KBJ+%22The+Mouse+Brain+in+Stereotaxic+Coordinates%22">The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates</a>. , (2008).</li>
<li>Cornell-Bell, A. H., Finkbeiner, S. M., Cooper, M. S., Smith, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutamate+induces+calcium+waves+in+cultured+astrocytes%3A+long-range+glial+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Glutamate induces calcium waves in cultured astrocytes: long-range glial signaling.</a> Science. 247, 470-473 (1990).</li>
<li>Iancu, R., Mohapel, P., Brundin, P., Paul, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+characterization+of+a+unilateral+6-OHDA-lesion+model+of+Parkinson%27s+disease+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Behavioral characterization of a unilateral 6-OHDA-lesion model of Parkinson's disease in mice.</a> Behav. Brain Res. 162, 1-10 (2005).</li>
<li>Tan, Y., Williams, E. A., Lancia, A. J., Zahm, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+altered+expression+of+tyrosine+hydroxylase+and+calbindin-D+28kD+immunoreactivities+and+viability+of+neurons+in+the+ventral+tegmental+area+of+Tsai+following+injections+of+6-hydroxydopamine+in+the+medial+forebrain+bundle+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">On the altered expression of tyrosine hydroxylase and calbindin-D 28kD immunoreactivities and viability of neurons in the ventral tegmental area of Tsai following injections of 6-hydroxydopamine in the medial forebrain bundle in the rat.</a> Brain Res. 869, 56-68 (2000).</li>
<li>Thiele, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+a+model+of+L-DOPA-induced+dyskinesia+in+two+different+mouse+strains%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Generation of a model of L-DOPA-induced dyskinesia in two different mouse strains.</a> J. Neurosci. Methods. 197, 193-208 (2011).</li>
<li>Henry, B., Crossman, A. R., Brotchie, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+rodent+model+in+which+to+investigate+the+molecular+and+cellular+mechanisms+underlying+the+pathophysiology+of+L-dopa-induced+dyskinesia%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Characterization of a rodent model in which to investigate the molecular and cellular mechanisms underlying the pathophysiology of L-dopa-induced dyskinesia.</a> Adv. Neurol. 78, 53-61 (1998).</li>
</ol>

著者らは、開示することは何もありません。

このプロトコルは高い病変成功率、低死亡率で、非常に再現性があるパーキンソン病の安定した片側6-OHDA-病変マウスモデル生成のための方法を説明します。 6-OHDA病変の手術の成功は容易に病変線条体27の&gt; 95％のドーパミンの枯渇を示す&gt; 70％ipsiversive回転と自発的な回転動作を測定することにより推定することができます。それが線条体ドーパミンレベル28の直接測定を提供するように線条体ドーパミンレベルの定量化は、黒質緻密部における数TH-陽性細胞のquantificiationに比べて線条体のドーパミンの枯渇の程度の最も正確な測定値です。このプロトコルは、パーキンソン病の1,4のよく特徴付け片側6-OHDA-病変モデルラットの注射部位（MFB）と病変開発 ​​の長さ（21日）を再現することを考えると、それは目を想定することができますこのマウスモデル、ラットモデルと同様に、反復するパーキンソン病の患者で観察された薬理学と脳回路の変化で。したがって、このメソッドは、トランスジェニックマウスではパーキンソン病の症状のモデルを生成するための手段を提供します...

<table border="1" &gt;<tbody&gt;<tr &gt;<td<strong試薬の&gt;名前</strong</td&gt;<td<strong&gt;会社概要</strong</td&gt;<td<strong&gt;カタログ番号</strong</td&gt;<td<strong&gt;コメント（オプション）</strong</td&gt;</tr&gt;<tr &gt;<td&gt;デシプラミン塩酸</td&gt;<td&gt; Sigma-Aldrichは、オークビル、ON、カナダ</td&gt;<td&gt; D125</td&gt;<td&gt; 25mg/kg</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;パージリン塩酸</td&gt;<td&gt; Sigma-Aldrichは、オークビル、ON、カナダ</td&gt;<td&gt; P8013</td&gt;<td&gt; 5mg/kgを</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 6-OHDAのHBr</td&gt;<td&gt; Sigma-Aldrichは、オークビル、ON、カナダ</td&gt;<td&gt; H116</td&gt;<td&gt; 3mgの/マウス</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;定位フレーム</td&gt;<td&gt; Kopfは楽器、タハンガ、CA、アメリカ合衆国</td&gt;<td&gt;モデル900</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;マウスの耳カップ</td&gt;<td&gt; Kopfは楽器、タハンガ、CA、アメリカ合衆国</td&gt;<td&gt;モデル921頬骨のイヤーカップ</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;マウス切歯バー</td&gt;<td&gt; Kopfは楽器、タハンガ、CA、アメリカ合衆国</td&gt;<td&gt;モデル923B</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;マウス麻酔マスク</td&gt;<td&gt; Kopfは楽器、タハンガ、CA、アメリカ合衆国</td&gt;<td&gt;モデル923B</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;プライミングキット（250ミリリットル注射器を含む）</td&gt;<td&gt;ハミルトン社、リノ、ネバダ州、アメリカ合衆国</td&gt;<td&gt; PRMKIT 81120</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; RN圧縮フィッティングキット（1ミリメートル）</td&gt;<td&gt;ハミルトン社、リノ、ネバダ州、アメリカ合衆国</td&gt;<td&gt; 55750から01</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<tdRN圧縮フィッティングキットから&gt; PEEKチューブ<
 (1/16<sup&gt; TH</sup&gt;インチ）</td&gt;<td&gt;ハミルトン社、リノ、ネバダ州、アメリカ合衆国</td&gt;<td&gt; 55751から01</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;デュアル小さなハブRNカプラ</td&gt;<td&gt;ハミルトン社、リノ、ネバダ州、アメリカ合衆国</td&gt;<td&gt; 55752から01</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;小さなハブRNアダプタにルアー</td&gt;<td&gt;ハミルトン社、リノ、ネバダ州、アメリカ合衆国</td&gt;<td&gt; 55753から01</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 1ミリリットル25Sシリンジモデル7001KH</td&gt;<td&gt;ハミルトン社、リノ、ネバダ州、アメリカ合衆国</td&gt;<td&gt; 80100</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; * 6の33Gニードル（RN）パック。 。 45 &lt;°のベベルを使用してカスタム1インチ</td&gt;<td&gt;ハミルトン社、リノ、ネバダ州、アメリカ合衆国</td&gt;<td&gt; 7803から05</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;はさみ</td&gt;<td&gt;ファイン科学ツール、バンクーバー、BC、カナダ。</td&gt;<td&gt; 14084から08</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;メス</td&gt;<td&gt;ファイン科学ツール、バンクーバー、BC、カナダ</td&gt;<td&gt; 10003から12</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;メスの刃</td&gt;<td&gt;ファイン科学ツール、バンクーバー、BC、カナダ</td&gt;<td&gt; 10035から20</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Forcep</td&gt;<td&gt;ファイン科学ツール、バンクーバー、BC、カナダ</td&gt;<td&gt; 11608から15</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Hemostats</td&gt;<td&gt;ファイン科学ツール、バンクーバー、BC、カナダ。</td&gt;<td&gt; 13004から14</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;イソフルラン</td&gt;<td&gt;アボット</td&gt;<td&gt; 02241315</td&gt;<td&gt;百分の2から3</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Suters（Vicryl 4.0）</td&gt;<td&gt; Syneture</td&gt;<td&gt; SS-683</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;滅菌器</td&gt;<td&gt;ファイン科学ツール、バンクーバー、BC、カナダ</td&gt;<td&gt; 18000から45</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;輸液ポンプ</td&gt;<td&gt;ハーバード装置</td&gt;<td&gt;博士2000分の22</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;針（27G）</td&gt;<td&gt;ベクトン·ディッキンソン</td&gt;<td&gt; 305109</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;針（25G）</td&gt;<td&gt;ベクトン·ディッキンソン</td&gt;<td&gt; 305127</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;シリンジ（1ミリリットル）</td&gt;<td&gt; BDシリンジ</td&gt;<td&gt; 309692</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;麻酔トロリー</td&gt;<td&gt; LEI医療</td&gt;<td&gt; M2000</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;バイトリル</td&gt;<td&gt; CDMV、セント·ヒヤシンス物語、QC</td&gt;<td&gt; 102207</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;リドカイン</td&gt;<td&gt; CDMV、セント·ヒヤシンス物語、QC</td&gt;<td&gt; 3914</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Betadineソリューション</td&gt;<td&gt; CDMV、セント·ヒヤシンス物語、QC</td&gt;<td&gt; 19955</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;</tbody&gt;</table

パーキンソン病の単方向、病変6-ohdaモデルマウスの開発

Development of a Unilaterally-lesioned 6-OHDA Mouse Model of Parkinson's Disease

パーキンソン病（PD）の一方的病変6 hyroxydopamine（6-OHDA） - 病変ラットモデルは、それが反復するで観察された大脳基底核回路と薬理学の変化をするので、パーキンソン症状の根底にあるメカニズムの理解を進める上で貴重であることが証明されているパーキンソン病患者の1-4。しかし、大脳基底核の主要な入力領域である線条体、内の出力経路の皮質-線条体シナプスで発生した正確な細胞および分子の変化は、とらえどころのないまま、これはパーキンソン病の症状の根底にある病理学的な異常が3を発生するサイトであると考えられている5。 PDでは、黒質 - 線条体経路の変性後に大脳基底核回路の変化のメカニズムを理解することが大幅に細菌人工染色体（BAC）マウスの開発促進によって駆動される過剰発現緑色蛍光タンパク質によって進められてきたそれらを分離して検討することができます8、：;：2線条体出力経路（EGFP-D2とEGFP-リパーゼA2a、間接的な経路EGFP-D1直接経路）の特定にはサインインしてください。たとえば、最近の研究では、パーキンソン病マウス9,10におけるシナプス可塑性の病理学的変化があることを示唆している。しかし、これらの研究は、若年マウスとパーキンソニズムの急性モデルを利用した。それは安定した6-OHDA病変を有する成人ラットでは説明した変更も、これらのモデルで発生するかどうかは不明である。他のグループが内側前脳束（MFB）をlesioning PDの安定した一方、病変6-OHDAの大人のマウスモデルを生成しようとしています、残念なことに、本研究では死亡率はわずか14％は21の手術を生き残ったと、非常に高かった日以上11。最近の研究は、低死亡率の両方で、イントラ黒質病変を生成したドーパミン作動性ニューロンの&gt; 80％の損失、L-DOPA誘発ジスキネジア11,12,13,14のしかし、式は変数であったこれらの研究インチPDの別の十分に確立されたマウスモデルでは、MPTP-病変マウス15である。このモデルは、潜在的な神経保護剤16の評価に有用であることが証明されたこのモデルは頻繁に運動障害を誘導するために失敗し、病変17の範囲の広い変動を示すように、それは、PDのメカニズムの基礎となる症状を理解するにはあまり適していながら、18 。 ここでは、安定した片側6-OHDA-病変マウス一貫して線条体ドーパミンの&gt; 95％の損失が発生するMFB（HPLCにより測定）に6-OHDAの直接投与によるPDのモデルと同様に、行動を生産を開発しました不均衡はPDのよく特徴付け片側6-OHDA-病変ラットモデルで観察された。 PDは、この新しく開発されたマウスモデルでは、パーキンソン症状の発生のメカニズムを理解する上で貴重なツ​​ールを証明します。

マウスの内側前脳束の片側6-OHDAの病変を行うためのプロトコルが記述されています。このメソッドは、線条体ドーパミンと90.63の&gt; 95％の損失を示す生存動物の89％と低い死亡率（13.3％）±-4.02％病変の側に向かってipsiversive回転バイアスを持っています。

パーキンソン病の単方向、病変6-OHDAモデルマウスの開発

片側的に6-ヒドロキシドパミン（6-OHDA）を投与したパーキンソン病（PD）ラットモデルは、我々の...を前進させる上で極めて有用であることが証明されています。

本手順の目的は、パーキンソン病のマウスモデルを作製することです。まず手術に使用する薬剤を準備し、次に手術器具をセットアップします。その後、片側性の6-ヒドロキシドパミン欠損手術を行い、適切な術後ケアを実施します。6匹の6-ヒドロキシドパミン処理を施した動物を行動実験に使用できます。最終的に、結果として内側前脳束において片側性で95%以上のドパミン枯渇が示されます。この手順において特に注意すべき重要な点は、まず、動物の生存を確実にするための適切な術後管理です。次に、6-ヒドロキシドーパミンの注入に向けた器具の準備を行い、神経毒が完全に投与されるようにします。まず、手術器具をオートクレーブで滅菌します。次に、すべての表面と器具をイソプロピルアルコールで清浄します。次に、底面にペーパータオルを敷いたマウス回復用ケージを用意し、術後の準備をします。ケージを加熱ランプの下または加熱パッドの上に配置し、麻酔用トロリーをセットアップします。酸素の流入が接続され、バルブが開いていること、およびイソフルランのリザーバーが完全に満たされていることを確認してください。その後、酸素流量を1%、イソフルランを2～4%に設定します。次のステップは、注入装置を組み立てることです。PEEKチューブの片側にRN金属ナットを1つねじ込み、続いてPEEKカップフェルールを取り付けます。次に、円錐形PFAフェルールを取り付け、円錐形PFAフェルールの円錐部分がPEEKカップフェルールの嵌合部に滑り込むようにフェルールの向きを調整します。次に、接合したピークカップと標準的なPFAフェルールをデュアル・スモールハブRNカプラーの両端に配置し、デュアル・スモールハブRNカプラーの反対側にあるRNメタルナットを締めます。33ゲージの注入針を挿入します。針をRNメタルナットの一方に通し、ナットを締めます。33ゲージの針が、デュアルスモールハブRNカプラーに対して180度の角度になっていることを確認します。次に、ピークチューブの反対端にRNメタルナットを1つねじ込み、続いてピークカップフェルールを取り付けます。その後、標準的なPFAフェルールを2つ目のデュアルスモールハブRNカプラーの深い方の溝に挿入し、RNメタルナットを締めて接続を固定します。次に、2つ目の小型デュアルRNハブカプラーの反対端に、小型ハブRNアダプターへのルアーを挿入し、ルアーのRNメタルナットを締めて接続を固定します。これで注入装置のセットアップは完了です。次の準備ステップとして、注入装置のプライミングを行います。まず、250 µLおよび1 µLのHamiltonシリンジに滅菌水を満たします。気泡が入っていないことを確認してください。次に、250 µLシリンジをルアーアダプターに取り付け、250 µLシリンジのプランジャーを押し下げて、チューブの反対端にある33ゲージの注入針から水が出るようにします。250 µLシリンジをルアーアダプターから引き抜きながら、システムに水を流し続けます。ルアーアダプターの先端に小さな水滴を残した状態で、1 µLシリンジのプランジャーを押し、小さな水滴が排出されるまで操作します。次に、1 µLシリンジをルアーアダプターに慎重に挿入します。1 µLシリンジ上の水滴がルアーアダプター上の水滴と接触していることを確認します。次に、1 µLシリンジをルアーアダプターに完全に挿入し、小型デュアルRNハブカプラー内に気泡がないことを確認してください。その後、灌流装置を脳立体定位固定装置に固定し、輸液ポンプを用いて、33ゲージ注射針を備えた小型デュアルRNハブカプラーを脳立体定位固定装置のマニピュレーターアームに固定します。次に、1 µLシリンジを灌流ポンプに固定します。その後、操作の30分前に、注入速度を0.1 µL/minに設定して注入ポンプをプログラムします。動物を計量し、その体重を記録します。マウスに、2.5 mg/mLの塩酸ドーパミンと0.5 mg/mLの塩酸パルリンの混合液を10 mL/kgで腹腔内投与します。次に、手術中に動物の体温を維持するため、および定位固定装置のイヤーバーおよび切歯バーに適合する最適な高さに動物を保持するため、イヤーバーと切歯バーの下に温熱ディスクを配置します。塩酸ドーパミンと塩酸パルリンの混合液を投与した後、15分間待機します。マウスを密閉された痙攣誘発チャンバーに入れます。イソフルラン吸入により動物を麻酔します。後肢のピンチ刺激に反応しなくなり、瞬目反射が消失した時点で、動物は十分に麻酔されたことになります。次に、マウスの頭頂部を剃毛します。この時点で、マウスを脳定位固定装置にセットします。切歯バーを口に当て、麻酔マスクを顔に被せます。次に、イソフルランの流量を調整します。脱脂綿を用いて、局所麻酔薬のリドカインを皮膚に直接塗布します。切歯バーと耳カップを調整し、頭蓋骨の頂点を水平にします。次に、ベタジン溶液で皮膚を滅菌します。続いて、イヤカップを挿入します。頭部が完全に平らになり、どちらの方向にも動かなくなった状態で、イヤカップが正しく挿入されたことになります。その後、メスを用いて頭部の中線に沿って切開し、皮膚を剥離します。ガーゼパッドを使用して頭蓋骨の表面を乾燥させます。1 µLシリンジのプランジャーを押し下げ、33Gの注射針を15 mg/mLの1 mLチューブに挿入します。アルミホイルで覆った6-ヒドロキシドパミン溶液。33ゲージの注射針を6-ヒドロキシドパミン溶液に浸したまま、プランジャーをゆっくりと引き戻します。次に、注射針の先端をB bgmaに向けて進め、少量の6-ヒドロキシドパミン溶液を分注して、小さな液滴を形成させます。その後、注入針の先端をゆっくりと下ろします。ビーズがbgmaに触れたら、針の進行を止めてこれらの座標を記録してください。注入針を背側方向に2mm後退させ、正中縫合に沿ってLambda方向の吻側へ移動させます。Lambdaの直上に達したとき、注入針から少量の6-hydroxy dopamine溶液を分注し、小さな液滴を形成させます。次に、針先をゆっくりとLambdaに向かって下げます。液滴がLambdaに接触した時点で針の下降を止め、その座標を記録します。BMAとLambdaの正中・外側および背側・腹側の座標は一致している必要があります。一致していない場合は、切歯バーを適切に調整してください。前後方向の座標および正中・外側座標のための耳バーについては、針を注入座標まで移動させてください。AP -1.2 mm、ML -1.1 mmの相対的な位置において、注入針から少量の溶液を分注し、小さな液滴を形成します。その液滴を頭蓋骨の上に落とし、穿孔位置をマークします。その後、針を後退させ、25ゲージの針を用いて頭蓋骨に穴を開けます。注入針を注入座標に戻し、背腹方向に沿って-5 mmまで刺入します。次に、6-hydroxy dopamineまたは溶媒0.2 µLを、0.1 µL/minの速度で正中前脳束に片側的に注入します。6-hydroxy dopamineまたは溶媒の投与完了後、注入部位からの拡散を促すため、針をそのまま5分間留置します。その後、ゆっくりと針を抜き、頭皮の切開部を3箇所の縫合で閉じた後、乳酸リンゲル液 1 mLを皮下に投与します。最後に、動物をステレオタキシックフレームから取り出し、意識が回復するまで回復ケージに入れます。6-ヒドロキシドパミン病変手術から15〜21日後。神経毒による細胞死が完了した時点で、6-ヒドロキシドパミンによる病変作成の成功度を評価するために、自発的な360度回転を測定できます。この行動評価において、6-ヒドロキシドパミン誘発によるドパミン減少率が95%以上のマウスは、部分的な6-ヒドロキシドパミン病変を持つマウスや偽手術群のマウスよりも、有意に多くの同側性（ipsilateral）回転を示します。各個体におけるSALドパミンレベルと自発的な同側性回転の割合を相関させることで、6-ヒドロキシドパミン病変により70%以上の同側性回転を示したマウスは、Salドパミンが95%以上消失していることが分かります。このビデオを視聴することで、マウスにおいて立体定位的に、かつ灌流制御下で6-ヒドロキシドパミン病変を効果的に作成する方法を十分に理解できるはずです。これにより、95%以上のレベルでドパミン枯渇が誘導されます。また、マウスにおけるパーキンソン症の行動評価の方法についても理解を深めることができます。

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パーキンソン病モデルマウス：6 - OHドーパミンの病変から行動試験に

このビデオは、神経毒6-ヒドロキシドーパミン(6-OHDA)を脳に注入することにより、パーキンソン病のラットモデルを作成する手順を示しています。内側前脳束(MFB)への神経毒注入は、運動制御に関与するドーパミン作動性ニューロンを特異的に標的とし、それらの破壊を引き起こし、パーキンソン病の症状を再現します。...

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学ぶ、マウスにおける片側6-OHDA病変手術によるパーキンソン病モデルの作製法。前脳内側束への神経毒素投与で95%以上のドーパミン枯渇を達成し、低死亡率で行動実験に適した動物モデルを提供する。

パーキンソン病の単方向、病変6-OHDAモデルマウスの開発

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