神経筋接合部の再生を研究するためのマウスの腓骨神経損傷の誘導

後

ろ足を剃った麻酔をかけたマウスを手術用顕微鏡下に置きます。

剃った脚の皮膚を切開し、結合組織層を切り裂いて下にある筋肉を露出させます。

レトラクターを使用して、筋肉を分離して総腓骨神経を露出させます。

神経には運動ニューロンが含まれており、その軸索末端は筋線維と接続して神経筋接合部またはNMJを形成します。

膝の腓腹筋の腱と神経の交点を見つけます。

鉗子で神経を押さえ、圧力をかけて怪我を誘発します。

半透明の損傷部位は軸索損傷を示し、NMJ障害につながります。

軸索再生を導くために、神経の外側の神経上膜層が無傷であることを確認してください。

リトラクターを取り外し、筋肉を再調整します。切開部位を縫合し、マウスを回復させます。

損傷した軸索からのシグナルはマクロファージを動員して軸索の破片を取り除き、軸索の再生とNMJの再確立をサポートします。

マウスを手術板に置き、つま先をつまんでも反応がないことを確認します。手足を拘束具内で整列させ、対象の後肢を解剖学的に自然な位置に置き、膝関節を内旋または外旋せずにわずかに伸ばします。

次に、動物を手術用顕微鏡下に移します。そして、骨のある膝関節と前脛骨筋と腓腹筋の間の隆起が対物レンズを通して見えるまでボードを調整します。メスと鉗子を使用して、総腓骨神経の下にあるコースに垂直に皮膚を約3センチメートル切開します。表在筋膜を切開し続け、大腿二頭筋と外側広筋を露出させ、続いて接続する深部筋膜を1〜2センチメートル切開して筋肉を分離します。

次に、機械式レトラクターを使用して大腿二頭筋を尾側に後退させ、総腓骨神経を明らかにします。腓腹筋の外側頭の腱との交点が見つかるまで、神経を近位にたどります。次に、細い鉗子を使用して神経をつかみ、先端を腓腹筋腱の外側境界に平行に合わせます。そして、5秒間安定した集中圧力を加えて総腓骨神経を粉砕します。

鉗子を繊維に対して垂直に持ち、鉗子の先端のすぐ後ろの領域で組織をつかみます。そして、しっかりとした穏やかな圧力を加えて、腱の境界に沿って神経をきれいに直線的に押しつぶします。

手術用顕微鏡で神経を目視検査し、組織が完全に押しつぶされていることを確認します。神経は損傷部位で半透明に見えます。神経が十分に損傷している場合は、リトラクターを取り外します。そして、筋肉を解剖学的位置に再調整します。次に、6-0シルク縫合糸を使用して、1〜3本の単純な断続縫合糸で切開部位を閉じ、完全に回復するまで監視しながら清潔なケージ内の加熱パッドにマウスを置きます。