ハイドロゲルベースのマイクロカラムを用いたマイクロ組織工学ニューラルネットワークの開発

マイクロカラムを含む皿から始めます。マイクロカラムには、ハイドロゲルの外殻と細胞外マトリックス、またはECMコアがあります。

同じ皿に培地を一滴加えます。

ニューロン細胞凝集体を皿に移し、培地液滴の1つに入れます。

実体顕微鏡で観察し、マイクロカラムの両端に細胞凝集体を挿入します。

次に、播種したマイクロカラムを培地に移して細胞生存率を高めます。

ECMへの細胞の付着を可能にするためにインキュベートします。

実体顕微鏡を使用して、細胞の付着を確認します。次に、培地を加えて皿を覆い、インキュベートします。

付着したニューロンは、ECMを介して軸索を伸ばし始めます。

栄養レベルを維持するために、ハーフミディウムを定期的に新鮮な培地と交換してください。

時間が経つにつれて、軸索は成長し、マイクロカラムの全長にまたがり、ニューラルネットワークを形成します。

開発された微小組織工学ニューラルネットワークは、損傷した神経回路を再構築する準備ができています。

インキュベーション後すぐに細胞播種に進みます。約10〜20マイクロリットルの培地を、マイクロカラムを保持するペトリ皿の2つの自由領域に移します。マイクロピペットを使用してニューロン凝集体を個別に収集し、構築物を含むペトリ皿に移します。細胞の健康を維持するために、鉗子で凝集体を培地の小さなプールの1つに移動します。

実体顕微鏡で観察しながら、鉗子を使用して、一方向マイクロTENNの場合はマイクロカラムの一端に、双方向構造の場合は両端に凝集体を挿入します。次に、播種したマイクロカラムを培地のもう一方の小さなプールに移動して、脱水を避け、凝集体の健全性を維持します。すべてのマイクロカラムがロードされたら、摂氏37度、二酸化炭素5%で45分間インキュベートし、凝集体がECMに付着するようにします。

インキュベーション後、実体顕微鏡を使用して、凝集体がマイクロカラムの端に残っていることを確認します。最後に、ピペットを使用して、マイクロTENNを含むペトリ皿に培地を注意深く注ぎます。長期培養のために、皿を摂氏37度、二酸化炭素5%のインキュベーターに入れます。