Name: 網膜切片の形態学的解析 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-02-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 33 s
Description: 学ぶ網膜切片の形態学的解析法。内顆粒層厚さ測定、網膜神経節細胞数の定量化、細胞サイズ測定をH&E染色標本で実施。神経変性疾患研究に応用可能な系統的手法を習得できます。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

この研究室で目の研究の仕事はアメリカの健康アシスタント財団、ツツジ（1972）基本財産基金、およびHKU小規模プロジェクト基金（20097176185）でサポートされています。

1。ツール顕微鏡、ニコンステレオ調査官、MBFバイオサイエンス - MicroBrightField株式会社 2。準備<ol><li>任意の形態学的分析の作業を行う前に、それぞれの網膜サンプルは、4ミクロンの厚さで切片であり、H＆E染色を受ける。 </li><li>上部の周辺領域、上部の中央部、下側の周辺領域と、下部中央の領域 - 網膜セクションは4つの領域に分割されています。 </li><li>領域を定義した後、各領域の画像は、ニコンの明るい光顕微鏡下で10X40倍率で取得されます。 </li><li>今、私たちは、網膜の形態計測分析を行うことができます。 </li></ol> 3。 INLの厚さを測定<ol><li>各地域のINLの厚さの4つの測定値を測定した。 4行は、INLの外側の境界に輪郭のベースラインから垂直に描画されます。 </li><li>ステレオ捜査官と呼ばれるソフトウェアを開き、メインツールバーから40倍レンズを選択します。 </li><li>タブの "ファイル"の下の "画像を開く"を選択します。あなたが分析したいことが望ま網膜領域の画像を選択します。 </li><li>メインツールバーのドロップダウンリストボックスから、輪郭線の種類を選択し、 "自動移動"ボタンを押してください。 </li><li>右のトレースウィンドウ内をクリックし、 "単純なクリックしてトレース"を選択してください。 </li><li> INLの内側の境界に沿って輪郭線を描画します。 </li><li>描画が完了したら、右側のトレースウィンドウ内をクリックし、 "終了オープン輪郭"を選択します。 </li><li>マーカーツールバーでマーカーを選択して、接合点にマーカーを追加します。 </li><li>すべてのマーカーを追加した後、マーカーツールバーでマーカーのアイコンを選択解除します。 </li><li>マーカーの1つの中心にカーソルを置きます。 </li></ol><img src="/files/ftp_upload/3377/3377fig1.jpg" alt="図1" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="図1"><ol start="11"><li> "クイックを選択します。ツール ""タブの下で、 "角度を測定します。 </li></ol><img src="/files/ftp_upload/3377/3377fig2.jpg" alt="図2" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="図2"><ol start="12"><li>右のトレースウィンドウ内をクリックし、 "連続"オプションの選択を解除します。 </li><li>最初の行セグメントの終点のために選択マーカーに隣接しているマーカーの中心にクリックして、角度を測定します。 </li></ol><img src="/files/ftp_upload/3377/3377fig3.jpg" alt="図3" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="図3"><ol start="14"><li>その後、当該マーカーの中央にマウスを移動し、再度クリックします。 </li><li> INLの外側の境界線にゴムバンド線を拡張します。 </li><li> 90°に達するまでの角度を調整します。 </li></ol><img src="/files/ftp_upload/3377/3377fig4.jpg" alt="図4" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="図4"><ol start="17"><li>任意の位置で左クリックします。角度測定を示すダイアログボックスが右クリックした後にポップアップ表示されます。 </li><li>押すまだマウスを押しながら "Enter"キーを。 </li></ol><img src="/files/ftp_upload/3377/3377fig5.jpg" alt="図5" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="図5"><ol start="19"><li>ラインが​​1つの端から新たに選択最後に描画されるように、トレースウィンドウを左クリックしてください。 </li><li>右のトレースウィンドウ内をクリックし、 "終了オープン輪郭"を選択します。 </li></ol><img src="/files/ftp_upload/3377/3377fig6.jpg" alt="図6" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="図6"><ol start="21"><li>前述のようにまったく同じ方法で異なる位置で他の線を描画します。 </li><li>すべての行を描画した後、編集モードを選択し、それに応じて4ラインセグメントの名前を変更します。 </li><li> 4つの測定は、 "輪郭測定"ボタンを押すことによって得ることができます。 </li><li>これらの4つの測定値を選択し、 "クリップボードにコピー"をクリックしてスプレッドシートに貼り付けることができます。 </li><li>選択したタブの "ファイル"の下に "名前を付けて保存"。トレースデータは、データファイルとして保存することができます。 </li></ol><ol><li>タブの "ファイル"の下の "画像を開く"を選択します。あなたが分析したいことが望ま網膜領域の画像を選択します。 </li><li>メインツールバーのドロップダウンリストボックスから、輪郭線の種類を選択します。 </li><li>神経線維層（NFL）の境界に沿って輪郭線を描画します。 </li><li>オプションの "Endオープン輪郭"でトレースを終了します。 </li><li>それぞれの終わりに、1行の先端にマーカーと先端に近い位置で別のを追加します。 </li><li>マーカーツールバーのマーカーアイコンを選択解除します。 </li><li>先端のマーカーの中心にカーソルを置きます。 </li><li>タブの "ツール"の下にある "クイック測定角度"を選択します。 </li><li>右のトレースウィンドウ内をクリックし、 "連続"オプションの選択を解除します。 </li><li>ゴムバンド線を調整し、90°の角度を測定します。 </li><li>ダイアログボックスがポップアップされた後、 "Enter"キーを押します。 </li><li>左クリックトン彼は、新し​​い行が垂直に先端から延長することができるようにウィンドウをトレースします。 </li><li>もう終わりにまったく同じ方法で別の新しい線を引く。 </li><li> 2つの境界は、RGCの数がカウントされている内に作成されます。 </li><li>セルタッチがカウントされません除外ラインとして1つの境界線を選択してください。 </li><li>マーカーのいずれかのタイプを選択し、各ライブセルに1を添付してください。 </li><li>死んだ細胞のマーカーの別のタイプを選択します。 </li><li>に設定されたマーカーの種類ごとの数は、マーカーのツールバーに応じてマーカーアイコンの横に表示されます。 </li><li>編集モードを選択し、輪郭のベースラインを拾う。右のトレースウィンドウ内をクリックし、行の名前を変更します。 </li><li>コンターラインの長さは、 "輪郭測定"ボタンを押すことによって得ることができます。 </li><li>細胞の数は、長さのmm当たり表現することができます。 </li><li>選択したタブの "ファイル"の下に "名前を付けて保存"。ザトレースとマーカデータは、データファイルとして保存することができます。 </li></ol> 5。 RGCセルのセルサイズを測定する<ol><li>タブの "ファイル"の下の "画像を開く"を選択します。あなたが分析したいことが望ま網膜領域の画像を選択します。 </li><li>生細胞でのズームとメインツールバーのドロップダウンリストボックスから、輪郭線の種類を選択します。 </li><li>セルの円周に沿って輪郭線を描画します。 </li><li>約終了時には、右のトレースウィンドウをクリックすると "Endに近い輪郭"を選択してください。 </li><li>セルの面積は輪郭測定]ダイアログボックスでエリアの項目の下に表示されます。 </li></ol>

<ol><li>Lam, T. T., Abler, A. S., Tso, M. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N-Methyl-D-Aspartate+%28NMDA%29%C3%A2%E2%82%AC%E2%80%9CInduced+Apoptosis+in+Rat+Retina%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">N-Methyl-D-Aspartate (NMDA)â€“Induced Apoptosis in Rat Retina.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 40, 2391-2397 (1999).</li>
<li>Lam, T. T., Abler, A. S., Tso, M. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis+and+caspases+after+ischemia-reperfusion+injury+in+rat+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Apoptosis and caspases after ischemia-reperfusion injury in rat retina.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 40, 967-975 (1999).</li>
<li>Luo, X. G., Chiu, K., Lau, H. S., Lee, V. W. H., Yung, K. K. L., So, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Selective+Vulnerability+of+Retinal+Ganglion+Cells+in+Rat+Chronic+Ocular+Hypertension+Model+at+Early+Phase%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+and+Molecular+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">The Selective Vulnerability of Retinal Ganglion Cells in Rat Chronic Ocular Hypertension Model at Early Phase.</a> Cellular and Molecular Neurobiology. 29 (8), 1143-1151 (2009).</li>
<li>Han, Y. S., Chung, I. Y., Park, J. M., Yu, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroprotective+effect+of+citicoline+on+retinal+cell+damage+induced+by+kainic+acid+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Korean+J.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Neuroprotective effect of citicoline on retinal cell damage induced by kainic acid in rats.</a> Korean J. Ophthalmol. 19, 219-226 (2005).</li>
<li>Hernandez, M., Urcola, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+ganglion+cell+neuroprotection+in+a+rat+model+of+glaucoma+following+brimonidine%2C+latanoprost+or+combined+treatments%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Retinal ganglion cell neuroprotection in a rat model of glaucoma following brimonidine, latanoprost or combined treatments.</a> Exp. Eye Res. 86, 798-806 (2008).</li>
<li>Chan, H. C., Chang, R. C. C., Ip, A. K. C., Chiu, K., Yuen, W. H., Zee, S. Y., So, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroprotective+effects+of+Lycium+barbarum+Lynn+on+protecting+retinal+ganglion+cells+in+an+ocular+hypertension+model+of+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">Neuroprotective effects of Lycium barbarum Lynn on protecting retinal ganglion cells in an ocular hypertension model of glaucoma.</a> Experimental Neurology. 203, 269-273 (2007).</li>
</ol>

著者らは、開示することは何もありません。

1。より正確な厚さの測定値を得る方法は？ あなたは、トレースウィンドウ内のボタンと左クリック "ズーム"をクリックして画像を拡大することができます。 INL境界線がはっきりと見ることができます。ラインの先端がINLの外側の境界でない場合は、我々は、編集モードで行を調整することができます。関係線を選んだ後、右のトレースウィンドウをクリックして "選択した輪郭で挿入ポイント"を選択します。追加された点は、同じラインに沿っている必要がありますがポイントは、外側の境界線で追加することができます。その後、元のポイントを削除する必要がありますとより正確な長さのラインを得ることができます。 2。ゴムバンド線の90°を維持するには？ 度を示すダイアログボックスがポップアップ表示されたら、 "Enter"キーを押しながら、まだマウスを保持する必要があります。その後、新しい行を描画することができるように、トレースウィンドウを左クリックしてください。 ...

A correction was made to <a href="http://www.jove.com/video/3377">Morphometric Analyses of Retinal Sections</a>. There was an error with an author's name.

Erratum: Morphometric Analyses of Retinal Sections

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬の名前 </td><td> タイプ </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td></tr><tr><td>ステレオ捜査官</td><td> MBFバイオサイエンス解析ソフトウェア</td><td> MicroBrightフィールド</td><td></td></tr><tr><td>顕微鏡</td><td>オリンパスBX51 </td><td>オリンパス株式会社</td><td> BX51 </td></tr></tbody></table>

網膜切片の形態学的解析

Morphometric Analyses of Retinal Sections

網膜切片の形態学的分析は、網膜疾患を調べるに使用されている。例については、神経細胞が大幅にN-メチル-D-アスパラギン酸（NMDA）誘発性興奮1、網膜虚血再灌流障害2、緑内障3ラットモデルの網膜神経節細胞層（RGCL）で失われた。 INLおよび内網状層の減少（IPL）は、カイニン酸介在型グルタミン酸興奮毒性4に受けたラットの目にシチコリン治療と逆転した厚さ。 RGC密度とソーマのサイズの変化は、眼圧上昇3,5,6の目に別の薬物治療で観察した。したがって、網膜morphometriesを分析する客観的方法を持つことは、網膜の病態と治療戦略の有効性を評価する上で大きな意義であるかもしれない。 網膜の構造は、マルチレイヤーとニューロンEXIいくつかの異なる種類です。網膜の聖。そのような細胞数、細胞の大きさと異なった層の厚さとして、網膜の形態学的パラメータは、細胞培養系よりも複雑です。早い段階で、これらのパラメータは他の市販のイメージングソフトウェアを使用して検出することができます。値は相対値で、通常であり、正確な値に変更すると、さらに正確な計算が必要な場合があります。また、セルサイズと形態のトレースは、特に慢性緑内障モデルでは、正確な統計分析のための十分な感度ではありません。このプロトコルで使用されている測定値は、より正確かつ簡単な方法を提供しました。セルの行とサイズの絶対的な長さは、直接他のファイルにコピーすることが簡単に報告することができます。たとえば、我々は、INLの内側と外側の最も核のマージンを追跡して、厚さを測定するために90度の角度を描画するソフトウェアを使用してラインを形成した。ソフトウェアの助けを借りずに、多分斜線と網膜の厚さの変化がしれませんが個々のオブザーバーの間で再現性がありません。さらに、RGCの数と密度も定量することができる。このプロトコルは、成功すると、網膜の機能を定量の変動を減少させる最小限の変更を検出する感度を向上させます。 このビデオでは、網膜切片の形態学的分析の3種類のデモンストレーションを行います。彼らは、RGCの数を定量化し、絶対値でRGCのサイズを測定し、INLの厚さを測定しています。これらの3つの解析は、ステレオ調査官（ - MicroBrightField株式会社MBFバイオサイエンス）を用いて行われています。技術は、形態学的解析のためのシンプルでありながら科学的なプラットフォームを提供することができます。

このビデオでは、内顆粒層の厚さ、網膜神経節細胞（RGC）の数を定量化し、RGCのサイズを測定する測定含まれる網膜の形態学的分析、3つのタイプを示しています。技術は、形態学的解析のためのシンプルでありながら科学的なプラットフォームを提供することができます。

網膜切片の形態計測分析は、網膜疾患の検討に用いられてきた。例えば、...において神経細胞が有意に消失していた。

こんにちは。私は香港大学解剖学部の神経変性疾患研究室のReginaです。本日は、網膜切片の進行解析の手順について説明します。それでは始めましょう。解析を行う前に、網膜サンプルの切片を作成し、4 µmの厚さに切り出し、H&amp;E染色を行います。その後、網膜セッションを4つの領域に分割します。具体的には、上部周辺領域、上部中央領域、下部中央領域、および下部周辺領域です。領域を定義した後、decorの明視野顕微鏡を用いて、各領域の画像を10倍および40倍の倍率で取得します。それでは、網膜の形態情報を解析します。このセッションでは、内顆粒層の網膜厚を測定する方法を説明します。Thorough Investigatorというソフトウェアを起動してください。40 typesを選択し、メインの2つのバーから「image open」を選択します。「file」タブの下から、解析したい網膜領域の画像を選択してください。メインの2つのバーにあるドロップダウンから、等高線の種類を選択します。オートムーブがオンになっていることを確認してください。ズームインボタンをクリックすると、画像を拡大できます。ズームアウトボタンを使用すると、画像表示のサイズを小さくできます。トレースおよび標本の両方は、移動ボタンをクリックすることで4つの異なる方向に移動させることができます。トレースウィンドウ内で右クリックし、simple crack tracingを選択してください。内層の内側の境界に沿って輪郭線を引きます。間違いがあった場合は、トレースウィンドウで描画を中断し、元に戻すボタンを押して直前の描画点を消去してください。線の終点までトレースを続けます。描画が完了したら、トレースウィンドウで描画を中断し、オープンコンターを選択して、ズームインをクリックして画像を起動します。トレースウィンドウ内でボタンを左クリックします。画像を拡大するには、マーカー2バーでマーカーを選択し、接合点に配置してください。すべてのマーカーを追加した後、マーカー2のバー位置にあるマーカーアイコンを選択し、カーソルを合わせます。マーカーのいずれかの中心で、トレースウィンドウ内を右クリックし、タブの下にある「quick measure angles」を選択して、「continuous」オプションを選択します。選択したマーカーに隣接するマーカーの中心を順にクリックして、角度を測定します。線分端部については、関心領域の中心に向かって移動させます。マーカーと亀裂を確認してください。再度、ラバーバンドの線をinia層の外縁まで伸ばし、角度が90度になるまで調整します。目的の左側の亀裂まで移動します。クリック直後に、角度測定を表示するダイアログボックスが表示されます。マウスを左に保持したまま、Enterキーを押してください。トレースウィンドウ

morphometric-analyses-of-retinal-sections

Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

ヒト以外の霊長類は、開発と老化の理解のための重要な並進種です。霊長類の網膜の解剖学的組織は、ヒトの正常と病理学的状態に重要な洞察を提供することがあります。...

脳へのゲートウェイ：霊長目の解剖

網膜は脳と顕著な類似性を共有し、従って非侵襲的血管と脳の神経構造を研究するためのユニークなウィンドウを表します。このプロトコルでは、網膜のイメージング技術を用いた痴呆を調査する手法について説明します。このメソッドは、潜在的認知症の診断とリスク...

眼底イメージングを使用して認知症を研究するには

人間の網膜は中心窩、黄斑の周辺部網膜など、分子の機能と異なる領域で構成されます。ここでは、細かく分析し、下流のプロテオーム解析のこれらの異なる網膜領域を収集パンチ生検と組織人間の目からレイヤーを手動で削除を使用して、メソッドについて述べる。...

プロテオーム解析のための人間の網膜と網膜色素上皮・脈絡膜の解剖

ここでは、スペクトル領域光干渉断層撮影(SD-OCT)を用いて、網膜変性、緑内障、糖尿病性網膜症、近視のモデルにおいて、in...

光コヒーレンストモグラフィーを用いたげっ歯類モデルにおける眼疾患のin vivo構造評価

この記事では、実装網膜製剤全体に対する確立された再現性のあるレクチン染色アッセイと、増殖性および不拡散性網膜症において頻繁に変化する血管パラメータの定量的測定に必要なプロトコルについて説明する。...

不拡散性網膜症を有するマウスの全型網膜における血管パラメータの定量化

ここでは、マウス網膜症の診断と定量的測定を容易にするために、光干渉断層撮影法を用いた in vivo...

光干渉断層撮影法の網膜症モデルマウスへの応用

ヒトの眼の網膜から網膜色素上皮(RPE)を効率的に分離し、RPEの組織学的および形態学的解析のためにRPE/脈絡膜フラットマウント全体を生成する方法について説明します。...

組織学的分析のためのヒトの眼からの網膜色素上皮/脈絡膜フラットマウントの効率的かつ一貫した生成

マウスモデルは、網膜色素上皮(RPE)の生物学を調べるための有用なツールとなり得る。マウスは一連のRPE病理を発症する可能性があることが確立されています。ここでは、光、透過電子、および共焦点顕微鏡を使用してマウスのRPE病理を解明および定量化するための表現型プロトコルについて説明します。...

加齢黄斑変性症マウスモデルにおける網膜色素性上皮病変を評価および定量化するためのプロトコル

この原稿は、げっ歯類の眼球からのスライドの組織学的調製のためのプロトコルを提示します。提案手法により、内側の網膜を光学顕微鏡で容易に可視化し、評価することができる。この手順は、マウスとラットの眼球に提示されます。...

網膜を評価するためのラットおよびマウス眼球の組織学的スライドの調製と分析

網膜は、その層状構造全体で複雑な空間構成を示します。最新の空間トランスクリプトミクスおよびシーケンシング技術では、厚さ20μm&lt;組織切片が必要であり、網膜研究の適用性は限られています。この新鮮凍結凍結切片法は、平面的な空間的関係を維持しながら、マウス網膜の薄い 顔...

顔面 高次元空間分子解析のためのマウス網膜の凍結切片

学ぶ網膜切片の形態学的解析法。内顆粒層厚さ測定、網膜神経節細胞数の定量化、細胞サイズ測定をH&E染色標本で実施。神経変性疾患研究に応用可能な系統的手法を習得できます。

網膜切片の形態学的解析

さらに動画を探す