網膜切片の形態学的解析
February 19th, 2012
このビデオでは、内顆粒層の厚さ、網膜神経節細胞（RGC）の数を定量化し、RGCのサイズを測定する測定含まれる網膜の形態学的分析、3つのタイプを示しています。技術は、形態学的解析のためのシンプルでありながら科学的なプラットフォームを提供することができます。
こんにちは、私は香港大学解剖学部神経変性疾患研究室のレジーナです。今日は、レチナールセッションの進行分析の方法をご紹介します。まず始めましょう 分析を行う前に、網膜サンプルの後退と4つのMyFitnessを行い、hとeの染色を受けます。
その後、網膜セッションは4つの領域に分けられます。それらは、上部周辺領域、上部中央領域、下部中央領域、および下部周辺領域です。領域を定義した後、各領域の画像を装飾の明るいビーム顕微鏡で40倍の拡大率で取得します。
これで、網膜モーフィングの情報を分析する準備が整いました。このセッションでは、内核層の網膜の厚さを測定する方法を示します。thorough investigatorというソフトウェアを開きます。
40種類から選択し、メインの2つのバーから開いている画像を選択します。タブファイルの下で、分析したい目的の網膜領域の画像を選択します。メインの2本のバーのドロップダウンから等高線のタイプを選択します。
自動移動がオンになっていることを確認します。ズームインボタンをクリックすると、画像を拡大できます。ズームアウトボタンを使用して、画像表示の側面を縮小できます。
トレーシングと試験片の両方を、原因移動ボタンを割ることで4方向に沿って移動させることができます。トレースウィンドウを右クリックし、[単純な亀裂トレース]を選択します。内側のレイヤーの内側の境界線に沿ってcont線を描きます。
間違えた場合は、トレースウィンドウでそれを分割し、元に戻すボタンを押して最後の描画ポイントを消去します。ラインの最後のポイントまでトレースを続けます。描画が完了したら、トレースウィンドウで描画を中断し、開いている輪郭を選択し、[ズームイン]をクリックして画像を起動します。
左ボタン トレースウィンドウ内をクリックします。画像を拡大するには、Marcus のマーカー 2 バーでマーカーを選択します。ジャンクションポイントで。
すべてのマーカーを追加した後、マーカーの2つのバーの位置とカーソルでマーカーアイコンを選択します。マーカーの1つの中央で、トレースウィンドウのタブ2を右クリックして連続オプションを選択するタブでクイック測定角度を選択します。角度を測定するには、まず、選択したマーカーに隣接するマーカーの中心をクリックします。
線分セグメントの終点については、対象物の中心に最も移動します。マーカーと亀裂。再度、ラバーバンドラインをiniaレイヤーの外側の境界まで延長し、角度を90度まで調整します。
欲望に手を伸ばす 左の亀裂。角度測定を示すダイアログを配置すると、クリック直後にポップアップ表示されます。マウスを左に押したまま、Enterキーを押します。
トレース ウィンドウをクリックして、一方の端から新しい選択端点までラインを描画します。トレース ウィンドウで区切り、開いているコントロールを選択します。各領域の核層の内側の指を4回測定し、4本の線を引く必要があります。
コントロールベースナイトから垂直にインドの核層の外側の境界線まで、境界線がはっきり見えるように画像を発射します。線の先端が内側の核層の外側にない場合は、それらをリンクするか、編集モードで線を短くすることができます。編集モードを選択し、ラインをピックします。
非常にトレースウィンドウをクリックし、電気制御の検索ポイントで選択し、ポイントの編集が同じ線に沿っている必要がある間、外側の境界にポイントを追加します。元のポイントを削除します。その後、新しいリフトとの位置合わせを得ることができます。
ズームアウトボタンをクリックして、画像の側面を縮小します。編集モードの選択を解除し、最後の線分を描画します。順序の線を描画した後、編集モードを選択します。
トレースウィンドウを右クリックすると、それに応じて4つの線分が配置されます。これで、CONT測定ボタンを押すと、4つの測定値を取得できます。これらの4つの測定値を選択し、[コピー]をクリックして専門家に貼り付けます。
ボールをクリックするには、タブファイルの下の「名前を付けて保存」を選択します。トレーシング・データは、データ・ファイルとして保存できます。このパートでは、レッドテールガガンセルセレクト画像が開いている数を定量化します。
タブファイルの下で、分析したい目的の網膜領域の画像を選択します。まず第一に、どれがライフスタイルで、どれが死細胞なのかを特定する必要があります。これらの細胞は、生命の網膜ガング細胞とは考えられずに、はっきりと観察された微妙な核を持つ大まかに実行されます。
小さく、凝縮した細胞がその細胞と見なされるものと比較されます。メインの2本のバーのドロップダウンから等高線のタイプを選択します。左の繊維層の境界に沿って線を描き、オプションでトレースし、輪郭を開きます。
各端を追加し、線の先端に 1 つのマーカーを追加し、もう 1 つのマーカーをチームの近くの位置に追加します。マーカー 2 バーでマーカー アイコンを選択します。カーソルをマーカーの中央に置きます。
先端で、タブの下の角度をすばやく測定します。トレースウィンドウで Two を右クリックすると、連続オプションとラバーバンド線のみを選択し、19 度の角度を測定できます。ドルボックスが追いついた直後にEnterキーを押します。
しかし、マウスはまだ同時に残っていることを忘れないでください。トレース ウィンドウを分割して、新しい行を先端から特に延長できるようにします。トレース ウィンドウを中断し、開いているコントロールを選択します。
別の端点とまったく同じ方法で、別の新しい線を描画します。ラチンガガン細胞の数をカウントする2つの境界を作成しました。マーカーの種類を1種類選択し、5つのセルごとに1つずつ取り付けます。
除外線として 1 つの境界を選択しますが、セルが接する境界は現在のものではありません。死んだセルの別の種類のマーカーを選択します。マーカースペースの各タイプの番号は、マーカーアイコンの横に表示されます。だから。
マーカーの 2 つのバーで、編集モードを選択し、輪郭のベースラインを選択します。トレースウィンドウで分割し、行を再び終了します。等高線ベースラインの名前は、等高線測定ボタンを押すことで取得できます。
その後、セルの数は名前のミリメートルあたりで表すことができます。それでは、タブファイルの下に保存しましょう。トレースデータとマーカーデータは、データファイルとして保存できます。
このパートでは、レチナールガンギングセルセレクトイメージオープンのセル側を測定する方法を示します。タブファイルの下で、分析したい目的の網膜領域の画像を選択します。前のパートで説明した基準に従って、生きた息ギャングセルを選択します。
したがって、ライフセルでは、メインの2本のバーの書き留めたスポットから等高線のタイプを選択します。セルの円周に沿って等高線を描画し、端点付近でトレースウィンドウを右に蹴り、端部を選択します。セルの領域は、制御測定ダイアログボックスの領域の項目の下に表示されます。
このビデオでは、網膜を客観的に分析できる3つの簡単な方法を紹介しました。うまくいけば、このビデオはのです。
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
概要
このビデオは網膜の形態測定分析の3つのタイプを示しています。網膜の内核層の厚さの測定、網膜神経節細胞（RGC）の数量化、RGCのサイズの測定が含まれます。この技術はこれらの分析のための科学的プラットフォームを提供します。
主要な研究構成要素
科学分野
- 神経科学
- 網膜形態測定
- 細胞量化
背景
- 網膜の健康は視力にとって重要です。
- 形態測定分析は網膜疾患の理解に役立ちます。
- 網膜神経節細胞は視覚情報を伝達するために不可欠です。
- RGCの測定は神経変性疾患への洞察を提供できます。
研究目的
- 網膜分析のための形態測定技術を示す。
- 網膜神経節細胞とそのサイズを量化します。
- 内核層の厚さを測定します。
使用方法
- 網膜サンプルの準備。
- ヘマトキシリンおよびエオジン（H&E）染色。
- 網膜を分析用に特定の領域に分割します。
- 様々な倍率での画像取得。
主要な結果
- 内核層の厚さの測定に成功しました。
- 網膜神経節細胞の数量化。
- 異なる網膜領域にわたるRGCサイズの評価。
- 網膜形態測定のための体系的アプローチの実証。
結論
- 提示された技術は網膜分析に効果的です。
- これらの方法は網膜病理の理解に役立ちます。
- 将来の研究は、このフレームワークを基にさらなる研究を行うことができます。
よくある質問
Executive Industry Relevance
Objective morphometric analysis of retinal sections enables precise quantification of neuronal loss and structural changes, supporting target validation in neurodegenerative disease models. By reducing measurement variability and increasing sensitivity to minimal changes, this approach enhances predictive confidence in evaluating therapeutic efficacy. It provides a translatable platform for assessing retinal pathologies across drug discovery stages.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Scientific Value: Enables interrogation of therapeutic hypotheses by quantifying retinal ganglion cell density and soma size alterations in disease models.
- Operational Value: Supports biological de-risking through reproducible measurement of inner nuclear layer thickness and cell layer morphometrics.
- Predictive Value: Facilitates portfolio triage by delivering absolute, copyable morphometric data for cross-study comparison.
Screening & Assay Development
- Assay Readiness: Prepares validated biological systems for downstream workflows via standardized region-based image acquisition and tracing protocols.
- Quantitative Output: Generates absolute length and size measurements directly exportable to analytical files, improving data consistency.
- Scalability: Enables reliable compound evaluation through reduced observer variability and increased sensitivity in detecting minimal retinal changes.
Translational & Preclinical Research
- Disease Relevance: Aligns with translational biomarker strategies by linking RGC loss and layer thickness changes to therapeutic outcomes in glaucoma and excitotoxicity models.
- Preclinical Continuity: Supports risk-adjusted advancement decisions through objective, repeatable morphometric endpoints across retinal regions.
- Mechanistic De-risking: Focuses on predictive valuation by isolating structural changes independent of functional assays.
Pipeline & Workflow Integration
This method integrates into the discovery continuum from early target validation through lead identification to preclinical evaluation, providing structural readouts that complement functional assessments in retinal disease models.
- Discovery Biology: Supports hypothesis testing and pathway clarification by quantifying cell number, size, and layer thickness in defined retinal regions.
- Screening: Delivers assay readiness and reproducibility through standardized H&E-stained section analysis and software-guided tracing.
- Analytics: Provides quantitative dependent variable measurements (cell count, soma size, layer thickness) enabling statistical comparison across treatment groups.
- Translational Research: Connects to preclinical continuity via disease-relevant structural endpoints in NMDA-induced excitotoxicity, ischemia-reperfusion, and glaucoma models.
- Enterprise Reuse: Establishes a reusable capability for retinal morphometry across multiple disease models and therapeutic interventions.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Predictive confidence in target validation through reduction of mechanistic ambiguity in retinal neurodegeneration.
- Operational Value: Standardization, reproducibility, and scalability of morphometric measurements across operators and sites.
- Strategic Value: Better go/no-go decisions, capital efficiency, and reduced late-stage biological risk via early structural biomarker detection.
- Portfolio Impact: Risk-adjusted prioritization and advancement decisions based on quantifiable retinal structural changes.
Implementation Considerations
- Required expertise in histology, microscopy, and morphometric software operation (Stereo Investigator).
- Instrumentation needs include brightfield microscope, computerized tracing system, and image analysis software.
- Cross-team standardization requires protocol adherence for region definition, tracing technique, and measurement replication.
- Adaptation considerations across model systems involve adjusting magnification, region sampling, and cell identification criteria.
- Practical limitations include dependency on tissue section quality and staining consistency for accurate border delineation.
