Name: マウスモデルにおける腸のティッシュエンジニアリング (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-12-01T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 45 s
Description: 学ぶマウスにおける組織工学的小腸作成法。オルガノイドユニット・オン・スキャフォールドアプローチを用いて、腸管採取からインプラントまでの手技を解説。再生医療や疾患モデリングへの応用が期待されます。

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トレイシーC. Grikscheit、エリック·R·バーセル、フレデリック·G·サラは、カリフォルニア再生医療研究所（CIRM）、助成番号RN2-00946から1（TCG）とTG2-01168（ERB、FGS）によってサポートされています。アリソン·L·シュペーアは大学外科エチコン学者の協会です。 Yashuhiro Torashimaは小児病院ロサンゼルスサバン研究所研究キャリア開発奨学金によって賄われています。

1。オルガノイドユニットの準備<ol><li>マウスの解剖（はさみや鉗子）のための適切なインスツルは、オートクレーブにより滅菌しなければならない。 </li><li>人道的に地元の動物実験委員会のプロトコルに従ってドナーマウスを安楽死させる。動物が進む前に死んでいることを確認してください。 </li><li>腹膜腔へのアクセスを得るために正中切開を行います。露出を改善するために必要なスキンフラップは反映させることができます。 </li><li>小腸を骨抜きとトライツ靱帯のすぐ遠位で割ります。シャープで優しい鈍的切開を使用して、その腸間膜から小腸を分離します。回盲部を識別し、これに近位小腸5ミリメートルを分割します。 </li><li>はさみを使用して、（インビトロジェン、アンチアンチ）10ミリリットル4℃、無菌ハンクス緩衝生理食塩水（HBSS、インビトロジェン、カールスバッド、カリフォルニア州）/ 1X抗生物質抗真菌薬でシャーレに腸間膜反対側縁に沿って長手方向にソリューションを腸を開きます。で開かれ、腸から糞便をクリア穏やかに撹拌し、次に4の10ミリリットル℃、滅菌HBSS / 1X抗抗15ミリリットル遠心チューブに開いた小腸を転送します。 </li><li> 4の10ミリリットル℃、試験管内抗抗滅菌HBSS / 1Xで開か腸を3回洗浄します。各洗浄は30秒間、15ミリリットル管の軽度の揺れを用いて行うことができる。振とう後、腸組織はチューブの底に沈む。間葉系デブリである浮遊物質を、捨ててください。ピペットで慎重に洗浄溶液を除去します。 </li><li> 4の10ミリリットル℃、はさみを使用して1mm未満正方形片に抗抗滅菌HBSS / 1Xとペトリ皿の中で洗浄した腸にミンチ。自動ピペットでミンチ材料を集め、試験管に入れます。 </li><li> 8分間500rpmでチューブを遠心分離します。脂肪と間充織含む上清を捨てる。 </li><li>滅菌HBSS / 1X抗抗プラス0.125 mg / mlのディスパーゼ（Invitrogen）および800単位/ mの10mlでみじん切り、洗浄した物質を消化リットルコラゲナーゼタイプ1（ワージントン、レイクウッドニュージャージー州）。消化溶液40mlを準備するには、ディスパーゼ、コラゲナーゼの142 mgを5 mgを秤量し、40mlの体積に滅菌HBSSを加算します。新たに各時間オルガノイドユニットが用意されているこの溶液を調製し、使い4℃まで、準備完了状態に保つ。ステップ1.8からペレットに直接消化溶液を追加します。 </li><li> 20分間37℃で消化液でみじん切り、洗浄材料を含有する試験管をインキュベートする。 </li><li>試験管を取り出し、さらに10mlのピペットを用いて磨砕することによって消化された組織を混乱させる。均一な外観が得られるまで、20から50回の間で繰り返します。 </li><li> 800 rpmで5分間試験管を遠心分離します。単一細胞を含む上清を捨てる。 </li><li> 4℃、滅菌したダルベッコ改変イーグル培地（DMEM、Invitrogen）にプラス10％（v / v）の熱不活化ウシ胎児血清（HI-FBS、Invitrogen）を10mlの消化反応を停止します。ペレを再懸濁しトンとチューブを横に振る。 </li><li> 800 rpmで5分間試験管を遠心分離します。最後の数滴まで、自動ピペットで注意深く上清を取り除きます。ペレットを再懸濁し避けるために最後の数滴のための使い捨てのプラスチックピペットを使用しています。 </li></ol> 2。ポリグリコール酸の足場のロード<ol><li>不織布、ポリグリコール酸（2mmの板厚、60mgのcm-3の嵩密度、気孔率&gt; 95％、コンコルディア繊維、コベントリー、RI）からフォームが2 mm長、5 mmの外径が円筒形の足場文献に記載されているよう。 4。 </li><li>蒸留水に70％エタノールを用いて調製し、ハサミで転倒使い捨て千マイクロピペットの先端2mmをトリムします。 </li><li> 4ウェル培養プレートに足場を置きます。第1のルーメンにしてから、外側の表面に、1000マイクロリットルピペットで足場上オルガノイドユニットをロード。内腔の被覆を確実にするためにピンセットを使用しています。妨害したり、ポリマーの円筒形状を開いて壊してはいけません。 </LI&gt; </ol> 3。ホストマウスへの移植<ol><li>可能な場合はドナーと同じ背景に同系宿主マウスを使用してください。それ以外の場合は、（ジャクソン研究所、サクラメントカリフォルニア州）、免疫不全非肥満糖尿病/重症複合免疫不全またはNOD / SCID動物を採用しています。 </li><li>イソフルランで全身麻酔を誘導する。 、prepを剃るとマウスの腹部をドレープ。 </li><li>腹膜腔への入り口を得るために5ミリメートル正中切開を行います。識別し、慎重に大網を骨抜きにする。大網上にロードされたポリマーを置き、ティッシュで包んでください。大網が破れないようにしてください。 </li><li> 5から0 monocryl縫合糸で大網にポリマーを固定します。そっとその解剖学的位置に包まれたポリマーと大網を交換してください。 </li><li> 4から0ビクリル縫合糸を使用して、レイヤーで腹部切開を閉じます。筋肉の閉鎖を実行し、切開下腹部内臓を傷つけないように注意してください。肌のために中断された縫合糸を使用して、。 </li><li>切開に隣接皮下膨疹として滅菌水で2 mg / kgのケトプロフェン（Ketofen、フォートダッジ·アニマルヘルス）による術後鎮痛を管理します。動物を毎日評価されるべきであり、動物が痛みや苦痛の徴候を実証されている場合は、ケトプロフェンの追加投与は術後2日目に投与してもよい。術後3日目までに、動物は完全に痛みや苦痛の証拠なしで回復されるべきである。痛みや苦痛は、術後3日目に続く場合は、これは異常とみなされ、動物実験委員会及び動物飼育施設のプロトコールに従って対処すべきである。 </li><li>静養するには、マウスや組織工学腸が4週間にわたって成長させる。 Septra 200ミリグラム/ 1:100希釈で5ミリリットル当たり40ミリグラム（ハイテクPharmacal、アミティニューヨーク州）とげっ歯類（ラボダイエット5001、PMIニュートリション、セントルイス、ミズーリ州）と水に動物の不断のアクセス権を与えます。 </li></ol> 4。収穫<ol><li>フーマーnely 4週間注入した後、宿主動物を安楽死させる。 </li><li>元の切開をもう一度開いて、腹膜腔へのアクセスを容易にするために頭の方にスキンが反映されています。 </li><li>筋層を開き、組織の地球儀として組織工学構築物を識別します。 </li><li>鋭い解剖を用いて腹腔内内臓からコンストラクトに癒着を降ろす。 </li><li>取り付け後パラフィンホルマリンでコンストラクトを修正するか、そのようなリアルタイムPCRまたはタンパク質の単離などの生化学的アッセイのための新鮮な組織を使用しています。 </li></ol>

<ol><li>Grikscheit, T. C., Siddique, A., Ochoa, E. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-engineered+small+intestine+improves+recovery+after+massive+small+bowel+resection%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Surg%22%5BJournal%5D)">Tissue-engineered small intestine improves recovery after massive small bowel resection.</a> Ann. Surg. 240, 748-754 (2004).</li>
<li>Wales, P. W., Christison-Lagay, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short+bowel+syndrome%3A+epidemiology+and+etiology%5BTitle%5D)+AND+%22Sem.+Ped.+Surg%22%5BJournal%5D)">Short bowel syndrome: epidemiology and etiology.</a> Sem. Ped. Surg. 19, 3-9 (2010).</li>
<li>Evans, G. S., Flint, N., Somers, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+development+of+a+method+for+the+preparation+of+rat+intestinal+epithelial+cell+primary+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">The development of a method for the preparation of rat intestinal epithelial cell primary cultures.</a> J. Cell Sci. 101, 219-231 (1992).</li>
<li>Sala, F. G., Matthews, J. A., Speer, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+multicellular+approach+forms+a+significant+amount+of+tissue-engineered+small+intestine+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Tiss.+Eng.+Part+A%22%5BJournal%5D)">A multicellular approach forms a significant amount of tissue-engineered small intestine in the mouse.</a> Tiss. Eng. Part A. 17, 1841-1850 (2011).</li>
<li>Speer, A. L., Sala, F. G., Matthews, J. A., Grikscheit, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+tissue-engineered+stomach+demonstrates+epithelial+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Surg.+Res%22%5BJournal%5D)">Murine tissue-engineered stomach demonstrates epithelial differentiation.</a> J. Surg. Res. 171, 6-14 (2011).</li>
<li>Haxhija, E. Q., Yang, H., Spencer, A. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+epithelial+cell+proliferation+is+dependent+on+the+site+of+massive+small+bowel+resection%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr.+Surg.+Int%22%5BJournal%5D)">Intestinal epithelial cell proliferation is dependent on the site of massive small bowel resection.</a> Pediatr. Surg. Int. 23, 379-390 (2007).</li>
<li>Zhao, L., Cheng, Z., Dhall, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+corrective+pullthrough+surgery+in+a+mouse+model+of+Hirschsprung%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pediatr.+Surg%22%5BJournal%5D)">A novel corrective pullthrough surgery in a mouse model of Hirschsprung's disease.</a> J. Pediatr. Surg. 44, 759-766 (2009).</li>
<li>Petrosyan, M., Guner, Y. S., Williams, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+concepts+regarding+the+pathogenesis+of+necrotizing+enterocolitis%5BTitle%5D)+AND+%22Ped.+Surg.+Int%22%5BJournal%5D)">Current concepts regarding the pathogenesis of necrotizing enterocolitis.</a> Ped. Surg. Int. 25, 309-318 (2009).</li>
<li>Shew, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+concerns+in+malrotation+and+midgut+volvulus%5BTitle%5D)+AND+%22Ped.+Radiol%22%5BJournal%5D)">Surgical concerns in malrotation and midgut volvulus.</a> Ped. Radiol. 39, S167-S171 (2009).</li>
<li>Sampietro, G. M., Corsi, F., Maconi, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prospective+study+of+long-term+results+and+prognostic+factors+after+conservative+surgery+for+small+bowel+Crohn%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Gastroenterol.+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Prospective study of long-term results and prognostic factors after conservative surgery for small bowel Crohn's disease.</a> Clin. Gastroenterol. Hepatol. 7, 183-191 (2009).</li>
<li>Klempnauer, J., Grothues, F., Bektas, H., Pichlmayr, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+results+after+surgery+for+acute+mesenteric+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Long-term results after surgery for acute mesenteric ischemia.</a> Surgery. , 121-239 (1997).</li>
<li>Fitzgibbons, S. C., Jones, B. A., Hull, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+between+biopsy-proven+parenteral+nutrition-associated+liver+fibrosis+and+biochemical+cholestasis+in+children+with+short+bowel+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Ped.+Surg%22%5BJournal%5D)">Relationship between biopsy-proven parenteral nutrition-associated liver fibrosis and biochemical cholestasis in children with short bowel syndrome.</a> J. Ped. Surg. 45, 95-99 (2010).</li>
<li>Spencer, A. U., Kovacevich, D., McKinney-Barnett, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pediatric+short+bowel+syndrome%3A+the+cost+of+comprehensive+care%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Clin.+Nutr%22%5BJournal%5D)">Pediatric short bowel syndrome: the cost of comprehensive care.</a> Am. J. Clin. Nutr. 88, 1552-1559 (2008).</li>
<li>Kato, T., Tzakis, A. G., Selvaggi, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+and+multivisceral+transplantation+in+children%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Surg%22%5BJournal%5D)">Intestinal and multivisceral transplantation in children.</a> Ann. Surg. 243, 756-766 (2006).</li>
<li>Reyes, J., Bueno, J., Kocoshis, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+status+of+intestinal+transplantation+in+children%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Ped.+Surg%22%5BJournal%5D)">Current status of intestinal transplantation in children.</a> J. Ped. Surg. 33, 243-254 (1998).</li>
</ol>

特別な利害関係は宣言されません。

我々はオルガノイドユニットオン足場のアプローチを用いて、マウスにおける組織工学腸を製造するためのプロトコルを提示。最も重要なステップは、オルガノイドユニットの準備のものです。ケアを十分に清掃し、機械的に組織を処理するために注意しなければなりませんが、消化が行われた後、平等なケアを行う（ステップ1.11）オルガノイドユニットをover​​digestまたはovertriturateないように注意する必要があります。これが完了しているなら、オルガノイドユニットがステップ1.12の上清中に失われる可能性がある単一の細胞に減少し、組織工学腸を生成するために生き残る可能性は低いことができ、腸の幹細胞ニッチとして、この中に保存されないケース。 マウスのサイズが小さいことは、それが直接、生体内でその機能をテストするために宿主動物の腸に構築する組織工学吻合することに挑戦することができます。あるいは、ラットは 、in vivo で吻合容易TESIの成長のための大きいモデルを表しており、既にこのような理由1のために実行されてい...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬の名称 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> コメント（オプション） </td></tr><tr><td> HBSS </td><td>ギブコ</td><td> 114170-112 </td><td></td></tr><tr><td>抗生物質抗真菌100X </td><td>インビトロジェン</td><td> 15240-062 </td><td></td></tr><tr><td>ディスパーゼ</td><td>ギブコ</td><td> 17105-041 </td><td></td></tr><tr><td>コラゲナーゼタイプ1 </td><td>ワージントン</td><td> LS004194 </td><td></td></tr><tr><td> DMEM高グルコース1X </td><td>ギブコ</td><td> 11995-065 </td><td></td></tr><tr><td>熱不活性化FBS </td><td>インビトロジェン</td><td> 16140-071 </td><td></td></tr><tr><td> Biofelt 100パーセントのPGA </td><td>コンコルディアメディカル</td><td> FELT01-1005 </td><td>献などのポリマーを調製するための。4 </td></tr><tr><td>ポリ-L-乳酸</td><td> Durect </td><td> B6002-1 </td><td>献などのポリマーを調製するための。 4 </td></tr><tr><td> I型コラーゲン、ラットの尾を入力</td><td>シグマアルドリッチ</td><td> C3867-1VL </td><td>献などのポリマーを調製するための。 4 </td></tr><tr><td>ケトプロフェン100 mg / mlの</td><td>フォートダッジ·アニマルヘルス</td><td> 71-KETOI-100から50 </td><td></td></tr><tr><td> LabDiet 5001げっ歯類</td><td> LabDiet </td><td> 5001 </td><td></td></tr><tr><td> Septra 200ミリグラム/ 5ミリリットル、USPあたり40ミリグラム</td><td>ハイテクPharmacal </td><td> 50383-824-16 </td><td></td></tr><tr><td>イソフルランは、USP </td><td>フェニックス医薬品</td><td> 57319-507-06 </td><td></td></tr></tbody></table>

マウスモデルにおける腸のティッシュエンジニアリング

Tissue Engineering of the Intestine in a Murine Model

組織工学小腸（TESI）が正常に40日以内に術前の重みに戻り、その結果、大量の小腸切除後のルイスラットを救出するために使用されてきました。ヒトでは1、巨大小腸切除は、短腸症候群になる可能性があり、機能的な吸収不良非経口栄養依存性、肝不全や肝硬変、multivisceral臓器移植の必要性を含む重要な罹患率、死亡率、医療費を付与する。2本論文では状態、我々はマウスモデルにおける組織工学腸を作成するための我々のプロトコルを記述し、文書化多細胞オルガノイドユニットオン足場アプローチ。オルガノイドユニットは粘膜と間葉の両方の要素を含む腸由来の多細胞集合体、3腸管幹細胞ニッチを維持している間に関係があります。進行中および今後の研究では4日に私たちの技術の変遷マウスは、この種で利用可能なトランスジェニックのツールを利用することによってTESI形成の間に関与するプロセスの調査が可能になります。免疫不全マウス系統の5可用性はまた、私たちは人間の腸組織への技術を適用し、人間のTESIの形成を最適化することを許可しますヒトへの移行前にマウス異種移植。我々の手法は、すでに人間の患者での使用が承認された適正製造基準（GMP）の試薬および材料を採用していますので、脱細胞化された動物の組織に頼るのアプローチに比べて大きな利点を提供しています。このメソッドの究極の目標は、短腸症候群に対する再生医療の治療戦略としてのヒトへの翻訳である。

図1は、ここに記載されたプロトコルの全体的なスキーマを示しています。このプロトコルの最終的な結果は、地球やルーメン、粘膜、粘膜下組織と組織工学マウス小腸の球状の構造になっており、筋図2Aを囲むと、原料ポリマー足場と比較して、典型的な地球を、 図2（b）は、同じ構造を表示します急激にその内腔を明らかにするためにbivalved 図3は培養4週間後の典型的な成功したコンストラクトのヘマトキシリン/エオシン染色したパラフィンマウント断面を示しています。献。 4、我々は時間の首尾よく89％（44インプラントの39アウト）組織工学腸を作り出すことができました。 失敗したコンストラクトはない粘膜の形態の一つである。それは、地球が最後の組織学的分析で粘膜を持っているかどうかの収穫時の肉眼的形態に基づいて判断することは不可能である。したがって生化学的アッセイはperformeある場合新鮮なコンストラクト組織上のdは、それぞれ地球の半分が固定し、パラフィンは、粘膜...

この記事とそれに付随するビデオはオルガノイドユニットオン足場のアプローチを使用して、マウスにおける組織工学腸を生成するための我々のプロトコルを提示します。

組織工学的に作製した小腸（TESI）は、広範な小腸切除後のルイスラットの救済に成功しており、その結果、...への回復が認められた。

このビデオでは、スキャフォールド上のオルガノイドユニットを用いたアプローチにより、マウスで組織工学的な小腸を生成する手法を実演します。本実験における動物の取り扱いは、施設動物ケアおよび使用委員会、ならびにロサンゼルス子供病院サヴォン研究センター動物ケア施設のガイドラインに従って行われました。最初のステップは、マウスの小腸全体の採取です。人道的に安楽死させたマウスと器具を70%エタノール水溶液で消毒し、正中切開を行って腹腔内に進入します。小腸を摘出し、トレイツ靭帯の直遠位で切断します。その後、腸間膜およびその血管から、鋭的におよび鈍的に剥離します。最後に、回盲弁から近位に5 mmの箇所で回腸を切断します。採取した小腸をスケールとともに示します。ここで、1倍抗生物質および抗真菌剤含有ハンクス緩衝生理食塩水中で、腸管を腸間膜対側縁に沿って縦方向に開きます。次に、シャーレ内で腸管から糞便を除去し、続いて試験管を用いてHBSSで3回繰り返し洗浄します。腸管組織はチューブの底に沈み、浮遊物は間質デブリであるため廃棄できます。洗浄液はピペットを用いて慎重に除去します。次に、ハサミを用いて腸管を1 mm²以下の大きさに細切します。細切した組織を自動ピペットで回収します。これで、洗浄済みの細切組織を消化に供する準備が整いました。消化液には、抗生物質・抗真菌剤入りHBSSを用い、0.125 mg/mLのDASEおよび800 U/mLのコラゲナーゼが含まれています。抗生物質・抗真菌剤入りHBSSと比較して、消化液が茶色味を帯びていることに注意してください。これは調製直後のものであり、10 mLをミンチ状の組織に加えます。これをローテーターを用いて37 °Cで20分間インキュベートします。次に、ここに示すように、ピペットで繰り返し吸引・吐出することで組織をさらに分散させます。均一な外観になるまで、この操作を20回から50回繰り返します。10 mL ピペットチップが最適です。次に、10% ウシ胎児血清含有 4 °C DMEM 3 mL を加えて反応を停止させます。その後、試料を 10 分間遠心分離します。500 RPMで遠心分離し、上清を捨てて、ペレットを10%胎児ウシ血清を含む4°CのDMEM 10 mLで再懸濁して洗浄します。その後、800 RPMで5分間遠心分離し、上清に残った単一細胞を捨てることで、それ以外のすべての組織を回収します。ペレットには、ピンセットで示されている上部の軽い物質および不要な物質とともに、オルガノイドユニットが含まれています。この層の下にある血清入りDMEMをピペットで除去します。その際、ピペットでペレットを懸濁させないよう注意してください。最後の数滴は、使い捨てプラスチックピペットを使用することでより安全に除去できます。ここに示すのは、本実験で使用したポリグリコール酸（PGA）ポリマー・スキャフォールドです。使い捨ての1000 µLピペットチップの先端2 mmを滅菌鋏で切り取ります。ポリマーから材料が拡散するのを最小限に抑えるため、4壁培養プレートを用いてポリマーにオルガノイドユニットをロードします。オルガノイドユニットをピペットを用いて、まず管腔内へ、次に外表面へとスキャフォールド上にロードします。2本目のピンセットを用いて管腔内が十分にコーティングされていることを確認し、その際、ポリマーの円筒形を損なわないよう注意します。トランスジェニックドナーを用いる場合のホストマウスには、免疫不全の非肥満糖尿病マウスを使用します。重症複合免疫不全γ鎖欠損（NSG）マウスを使用します。あるいは、同系ホストを移植に用いることも可能です。全身麻酔を導入後、腹部を剃毛し、消毒およびドレーピングを行います。0.5 cmの正中切開を行います。大網を同定し、慎重に体外へ露出させます。充填済みのポリマーを大網で包み、5-0 Monocryl縫合糸で固定します。大網を損傷させないことが極めて重要であり、さもなければ細胞が腹腔内に漏出する可能性があります。ポリマーを充填し固定した大網を腹腔内に戻し、層状に閉鎖します。閉鎖には4-0のVicryl縫合糸を用い、結節縫合で縫合します。まず筋層、次に皮膚に、術後鎮痛のためにケトプロフェンを滅菌水に溶解して2 mg/kgの用量で、切開部位に隣接して皮下投与します。移植から4週間後、宿主動物を人道的に安楽死させ、最初の切開部位を再び開きます。組織工学的に作製した構築物は球状として同定され、胃や腹腔内臓器に癒着している場合があります。癒着を鋭的に剥離し、組織工学的に作製した腸管のステロイドを回収します。ここでは、回収したステロイドと開始時のポリマーを直接比較して示しています。この画像では、作製した腸管の内腔を鋭的に切開し、内部を露出させています。組織は、他の論文で示したように、組織学的解析のために固定するか、あるいは様々な分子生物学的アッセイに新鮮なまま使用することができます。ここに示しているのは、典型的な組織工学的小腸構築物の低倍率ヘマトキシリン・エオジン染色顕微鏡写真です。左側の矢印は腸粘膜が裏打ちされた管腔を示し、右側の矢印は宿主の膵臓を示しています。それがコンストラクトに付着しました。

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JoVE Journal

Bioengineering

バイオエンジニアリング（生体工学）

このビデオでは、マウスモデルにおける腸切除の詳細なプロトコルについて説明しています。この手法は、回腸切除術によるマウス腸内の胆汁吸収不良、過剰蓄積、および毒性に関する洞察を提供します。...

マウス回腸切除モデル:マウスモデルにおける回腸切除術誘発性胆汁代謝の研究

このビデオでは、マウスモデルで腸の透過性を研究するための回腸ループモデルの生成を示しています。この方法は、上皮バリア機能とそれに伴う免疫応答を理解するためのライブモデルを提供します。...

マウス回腸ループモデル:マウスの腸透過性を研究するための手術モデル

記事では、ラットの腸から無細胞マトリックスを製造するための方法論を説明します。腸の足場の導出は、細胞生物学および薬物検査幹、組織工学における将来の用途のために重要である。...

ナチュラル無細胞腸基質の産生のための脱細胞化の方法論

小動物イメージング技術は、シリアル診断検査およびインビボでの治療介入を行うことができる。最近では、適用範囲が大幅に拡大している、現在は大腸腫瘍発生の評価、創傷治癒および炎症の監視が含まれています。このプロトコルは、マウス内視鏡検査のこれらの多様な潜在的な用途を示している。...

マウス内視鏡検査のためインビボ発がんと腸の評価のマルチモーダルイメージング創傷治癒および炎症

腸の上皮幹細胞（のISC）は、パネート細胞と混在しています。これらの細胞は、のISCをサポートするISCの子孫を分化し、抗菌保護を提供しています。ここでは、我々はパネート細胞は腸管上皮を維持する上で重要な役割を果たしていることを確立するために、トランスジェニック条件付きマウスモデルを使用する方法を示します。...

条件を使用して、マウス腸の再生成にパネート細胞の役割を分析するためのプロトコル<em&gt;のCre-LOX</em&gt;マウスモデル

ここでは、フィールド全体でこの技術の標準化を促進するために死亡することなく、再現性の傷害をもたらすマウスにおける腸管虚血再灌流の詳細な手順を説明します。腸管虚血再灌流障害のこのモデルは、損傷および再生の細胞および分子メカニズムを研究するために利用することができます。...

腸管虚血 - 再灌流傷害のマウスモデル

激しい腹痛、吐き気、嘔吐、便の通過を防止するを引き起こすことができる腸の部分的または完全な閉塞に腸内の障害物が。マウスの腸の部分的な obsructions...

腸の部分的な閉塞のマウス モデル

調節不整合な腸上皮バリア機能および免疫応答は、生理学的モデルの欠如のために十分に調査されていない炎症性腸疾患の特徴である。ここでは、生体内での粘膜透過性および白血球の採用を研究するために、十分に血管化され、外装された腸セグメントを採用したマウス腸管ループモデルについて述べている。...

標準化腸ループモデルを用いたマウスにおける腸透過性と好中球経上皮移動の機能評価

このプロトコルは、マウス小腸オルガノイドの樹立、マウス小腸固有層からの1型先天性リンパ系細胞の単離、および腸上皮細胞と1型先天性リンパ系細胞との間の双方向相互作用を研究するための両方の細胞型間の3次元(3D)共培養を確立するための詳細な指示を提供する。...

マウス小腸上皮オルガノイドと先天性リンパ球細胞との共培養

ここでは、基本的な3次元(3D)腸細胞株モデルシステムの構築と、固定された腸当等物の光学顕微鏡的評価のためのパラフィン包埋プロトコルについて説明します。選択したタンパク質を染色することで、1回の実験で複数の視覚的パラメータを解析し、前臨床薬物スクリーニング研究に活用することができます。...

免疫成分を用いた基本的な3次元(3D)腸管モデルシステム

腸の操作によって生成された術後イレウスのマウスモデルについて説明します。胃腸トランジット機能、病理学的変化、および免疫細胞の活性化は、手術の24時間後に評価されました。...

術後イレウスマウスモデル

学ぶマウスにおける組織工学的小腸作成法。オルガノイドユニット・オン・スキャフォールドアプローチを用いて、腸管採取からインプラントまでの手技を解説。再生医療や疾患モデリングへの応用が期待されます。

マウスモデルにおける腸のティッシュエンジニアリング

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