Name: の長期、高分解能共焦点タイムラプスイメージングシロイヌナズナ子葉表皮 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-12-31T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 1 s
Description: 学ぶシロイヌナズナ子葉の長期高分解能共焦点タイムラプスイメージング法。アガロース培地で固定し、気孔分化や蛍光タンパク質の動態を数日間追跡。植物表皮発生のリアルタイム解析に有用です。

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我々は、POLAR :: POLAR-EGFP構築するための時間経過プロトコルとリンPillitteriの開発を支援するためのアマンダRychelに感謝します。また、PM-rbが構築提供するためABRCに感謝しています。このプロトコルは、日本科学技術振興機構からさきがけ賞の支援により開発されました。 POLARの研究はまた、ワシントンロイヤリティ研究基金（RRF-4098）、国立科学財団（MCB-0855659）の大学によってサポートされていました。 KMPは、NSF大学院リサーチフェロー（DGE-0718124）であり、本学では、ハワードヒューズ-GBMFの研究者でもある。

1。種子消毒<ol><li> 33％の家庭用漂白剤、0.1％トリトンX-100：種子消毒液を準備します。 </li><li>所望の蛍光レポーターコンストラクト（s）と遺伝子型（S）1.7 mlチューブ、滅菌溶液1mlを適用を運ぶ場所の種。 15分間nutatorでインキュベートする。 </li><li>無菌フードでは、背後にある種子を残して、チューブから消毒液を除去するためにピペッターを使用しています。 1ミリリットル滅菌水ですすいでください。 4回繰り返します。 </li><li> 2日間以上、4℃でインキュベートする。 </li></ol> 2。商工会議所スライドメディアの準備<ol><li>溶解するまでバクト200mlのフラスコ内の水に寒天（アガロース純粋ではない）、およびマイクロ波の0.5％溶液の20ミリリットルを混ぜる。ソリューションを煮沸するときは注意してください。 </li><li>約60℃に冷却ソリューションを</li><li>ピペッターを用いた寒天溶液1mlを採取し、徐々にチャンバースライド内部のカバーガラス（ラボ·テックIIチェン＃1.5ドイツのカバーガラスシステム）に適用されます。ソリューションワットHICHは、接着剤や割れたガラスを溶かすことがあまりにも早すぎるホットまたは適用される。 </li><li>すぐに寒天溶液の第二mlを加える。寒天培地は完全にスライドチャンバーの底をカバーする必要があります。この最小限のメディアでは、水分を維持し、ガス拡散を可能にすることにより、四から五日間貯蔵養分​​が含まれている植物の子葉、、で開発をサポートするために十分です。 </li><li>チャンバーと実験台上でクールなスライドが覆われている。フラスコをしっかりとカバーされている場合、解決策は、将来の使用のために保存され、再加熱してもよい。 </li></ol> 3。種子の解剖<ol><li> 4°C貯蔵種子から無菌のチューブを取り外します。 </li><li>解剖顕微鏡のステージ上にティッシュペーパーを置き、水で湿らせます。滑らかな表面を作成するために組織を調整します。組織を切開するための種を安定させるために使用されています。 </li><li>ピペットでチューブから組織への20から30種を、ビューの解剖スコープのフィールドにそれらを配置するように注意してください。 </li><li>鋭い鉗子（Roboz、＃5生物学の先端）を使用して、慎重に苗内側から種皮を除去します。外側と内側の両方の外皮を除去しなければならない。 </li><li>撮像する際子葉、それは胚軸と幼根を除去するために有益である。子葉は、このプロトコルの下で数日間のために開発するのに十分な栄養素が含まれています。無傷の場合、胚軸は、ビューの時間経過のフィールドの子葉を外に移動し、劇的にまっすぐに長くなります。胚軸の自由子葉をスライスするためにメスを使用してください。 </li><li>マイクロチューブまたは同様に、水に浸漬解剖子葉を開催しています。 </li><li>子葉の希望数に達するまで3.4から3.6を繰り返します。 15から20まで成功解剖をマウントする前に、推奨されています。 </li></ol> 4。チャンバースライドで取り付け子葉<ol><li>小さ ​​い（18 mm 2）のカバースリップ、寒天培地をカットとチャンバースライドのガラス基盤からレイヤー全体を持ち上げるを使用。 </li><li>持ち株からの水の最低ピペット解剖子葉持ち上げた寒天層下チャンバースライドにチューブ。 </li><li>優しく子葉上に寒天を下げる。余分な水が存在する場合は、子葉を乱さないように注意しながら、組織とそれを取り除く。マウントが完了すると、標本はもはや簡単に移動するべきではありません。 </li><li>チャンバースライドにカバーを置き、顕微鏡のステージにスライドを移動します。 </li></ol> 5。タイムラプスイメージング<ol><li>画像希望のフルオロフォア（s）に倒立共焦点顕微鏡をセットアップします。使用LSM700パラメータ：GFP、440から530 nmのバンドパスフィルターと488nmおよびコレクションでの励起のために、RFP、570から610 nmのバンドパスフィルターと555 nmおよびコレクションでの励起のために。 </li><li>マウントされた損傷のために検体を検査します。顕微鏡ソフトにプログラムそのまま、正しくマウント子葉の場所を。禅、2009年：20倍対物レンズとチャンバースライドの中心に客観的な動きに子葉に焦点を当てる。 アクイジションモード下では、0.5にズームを変更し、 フレームサイズ&lt;/ 48x48ピクセルにem&gt;です。 体位体位下のチェックボックスをオンにして、 スキャンの概要のイメージ[...]ボタンを選択し、30から35に水平方向および垂直方向のタイル数を増やします。スキャンが完了すると、観察する各子葉で[ディメンション]タブと場所の十字線の下に位置]ボタンをクリックします。 </li><li>すべてsamples.In禅2009の子葉の表皮を網羅Zシリーズを設定しますzスタックチェックボックスをクリックします。 ポジション·リストの下の各位置を選択し、ボタンに移動]をクリックします 。子葉の表皮の最上層の面に焦点を当てると、Zスタックの下の最初に設定 ]ボタンをクリックします。表皮が有用に表示されている最も低い位置にピントを合わせて設定された最後のボタンをクリックします。設定するには、最善のzスライス厚を示して、 最適の横にあるボタンをクリックしてください。これらの設定は、すべてのサンプルを包含することを確認するために各子葉をチェックし、zパラメータは個人ラージヒルに設定することはできません禅2009年idual位置。 </li><li>目的の解像度と長さの時系列を設定します。 3日間15〜30分の間隔は、表皮細胞分裂におけるタンパク質ダイナミクスのに有効である。この間隔は、必要に応じて変更することができます。禅2009年： 時系列チェックボックスをクリックします。 時系列の下では、テキストフィールドにスライダーやタイピングを用いて所望の画像の数のためにサイクルを設定します 。 30 の間隔を設定すると min を選択するプルダウンメニューを使用しています。 </li><li> xyzt多位置のスキャンを開始します。位置の数は、スキャンの仕様によって制限されなければならないことに注意してください。合計スキャン時間は、所望の間隔よりも大きい場合には、時点が正確でなくなります。 6同時位置の最大値は59で撮像する際GFPおよびRFP可能です我々のシステムを用いて30分間隔でzスライス。希望する解像度に変更フレームサイズと実験の開始]をクリックします ：2009年の禅。 </li></ol> 6。ビデオの編集<ol><li>共焦点データファイルから、最大強度、TIFFなどロスレス形式の画像ファイルとして各時間/位置の組み合わせと輸出のz投影する。ファイル名は、映画にそれらを結合するためのソフトウェアのための位置ごとに1シリーズ（ 例えば 、極性GFP_0001_pos1など、POLAR-GFP_pos1_0001、POLAR-GFP_pos1_0002ない）でなければなりません。禅2009年：その後、別々のファイル、 最大値投影にポジションを分割する処理]タブの下のサブセット：コピーを使用します。最後に、TIFF（： -シリーズエクスポート、フル解像度の画像ウィンドウファイル ）としてエクスポートします。 </li><li> bUnwarpJマクロ9（：登録：bUnwarpJプラグイン ） を実行して、連続した画像を配置するフィジー7,8を使用しています。 Monoに登録モードを変更します。すべての詳細オプションは、デフォルト値を使用することができます。長い時間の経過シーケンスの場合、自動的に一連の画像にbUnwarpJを適用するマクロ &quot;アフィン+一貫弾性2Dイメージのレジストレーション&quot;、およびオープンyをダウンロードしてインストールするそれを使用するイメージシーケンス：インポート：我々のデータは、 ファイルを使用しています 。 MOPSのランドマーク抽出と実行のチェックをはずします。 </li><li>整列した一連の画像を開いて、目的のビデオ形式（AVIは良い選択です）で保存するフィジー/ ImageJのまたはQuickTime Proを使用しています。 </li></ol>

<ol><li>Sulston, J. E., Schierenberg, E., White, J. G., Thomson, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Embryonic+Cell+Lineage+of+the+Nematode+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">The Embryonic Cell Lineage of the Nematode Caenorhabditis elegans.</a> Developmental Biology. 100, 64(1983).</li>
<li>Foe, V., Odell, G., Edgar, B. A. Chapter 3 Mitosis and Morphogenesis: Point and Counterpoint. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFoe%2C+V+%22Development+of+Drosophila+melanogaster%22">Development of Drosophila melanogaster</a>. Bate, M., Martinez Arias, A. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. Plainview, NY. (1993).</li>
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<li>Grandjean, O., Vernoux, T., Laufs, P., Belcram, K., Mizukami, Y., Traas, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Vivo+Analysis+of+Cell+Division%2C+Cell+Growth%2C+and+Differentiation+at+the+Shoot+Apical+Meristem+in+Arabidopsis%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">In Vivo Analysis of Cell Division, Cell Growth, and Differentiation at the Shoot Apical Meristem in Arabidopsis.</a> Plant Cell. 16 (1), 74(2004).</li>
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<li>Campilho, A., Garcia, B., Toorn, H. V., Wijk, H. V., Campilho, A., Scheres, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time-Lapse+Analysis+of+Stem-cell+Divisions+in+the+Arabidopsis+thaliana+Root+Meristem%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Journal%22%5BJournal%5D)">Time-Lapse Analysis of Stem-cell Divisions in the Arabidopsis thaliana Root Meristem.</a> Plant Journal. 48, 619(2006).</li>
</ol>

特別な利害関係は宣言されません。

このタイムラプス共焦点技術は極性および他の動的に変化するタンパク質の場合には、それらの機能を適切に理解するために重要であるシロイヌナズナの子葉の表皮の個々の細胞の蛍光標識タンパク質の発現と局在の縦断的研究を可能にします。以前は、持続時間タイムラプスイメージングはシロイヌナズナの根真菌感染症11、分裂組織の成長5,12を調べるために使用しますが、子葉の表皮を追加すると、この技術の汎用性を拡大し、付加的なタンパク質のためのその使用を可能にし、特に気孔発生の拡大分野を支援しています。 プロトコルの主な制限は、それが現在、彼らは開発の初期段階に必要な栄養素が含まれて子葉に制限されることである。また、子葉の開発はゲル媒体はガス交換が制限されるため、空気中で受けたものと正確に同じではありません。スキャンラSER曝露と部屋の照明は、子葉展開と葉緑体の成熟を ​​誘導する、光形態形成に適しているが、気孔は時折、低CO 2濃度による隣接ペアで開発することがあります。この傾向は、このプロトコルで指示さ...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬の名称 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> 注釈 </td></tr><tr><td>バクト寒天</td><td> BD </td><td> 214010 </td><td></td></tr><tr><td>ワンチャンバースライド</td><td>ヌンク（サーモサイエンティフィック） </td><td> 15536​​0 </td><td>または二室（155379） </td></tr><tr><td>レーザースキャニング共焦点顕微鏡</td><td>ツァイス</td><td> LSM700 </td><td>禅2009ソフトウェア</td></tr><tr><td> 20倍の対物レンズ</td><td>ツァイス</td><td> 420650-9901 </td><td> NAが0.8、プラン·アポクロマート</td></tr><tr><td>解剖顕微鏡</td><td>ベンツ（ナショナル） </td><td> 431TBL </td><td>下から照らす</td></tr><tr><td> ＃5鉗子、生物学の先端</td><td> Roboz手術器具</td><td> RS-4978 </td><td>非常に細かいヒント重要である</td></tr></tbody></table>

の長期、高分解能共焦点タイムラプスイメージング<em&gt;シロイヌナズナ子葉</em発芽過程&gt;表皮

Long-term, High-resolution Confocal Time Lapse Imaging of Arabidopsis Cotyledon Epidermis during Germination

発達シーケンス全体細胞挙動の in vivo動態のイメージングは組織パターン形成のメカニズムを理解するための強力なテクニックです。動物の発生時には、鍵の細胞増殖とパターニングのイベントは非常に迅速に行われます。例えば、幼虫の体の計画に必要な線虫（Caenorhabditis elegans）のすべての細胞分裂が7分裂サイクル1で、受精後6時間以内に完了され、 ショウジョウバエの胚発生の16以上の有糸分裂は、24時間2未満で発生します。これとは対照的に、植物の開発時に細胞分裂は、通常、3,4,5日のオーダーで、遅いです。これはユニークな挑戦と植物器官形成時の細胞分裂と分化のイベントの動的挙動を文書化するための長期的ライブイメージングの必要性を課している。 シロイヌナズナ表皮が植物にシグナリング、細胞の運命、そして開発を調査するための優れたモデル系である。子葉では、この組織は、空気と均等に分散気孔が点在して耐水性舗装細胞、開いたり閉じたり、ガス交換と水の損失を制御することをバルブで構成されています。これらの気孔の適切な間隔は、それらの機能に重要であり、その開発は、非対称分裂と組織表皮（ 図1）を生成する細胞分化段階の順序に従います。 このプロトコルは、開発の数日間にわたって表皮内の細胞やタンパク質の観察を可能にします。この時間枠は、幹細​​胞の分裂と気孔と表皮舗装細胞を含む表皮細胞の分化の正確なドキュメンテーションを可能にします。蛍光タンパク質は細胞分裂と分化の過程で、そのダイナミクスを評価するために、目的のタンパク質に融合させることができる。この手法は、番目の気孔系統細胞の増殖段階で、私たちは新規タンパク質、POLAR 6の局在を理解することができますそれが細胞内で発現されている電子シロイヌナズナ子葉表皮は、除算が発生する直前に細胞表層の特性領域に非対称分裂のイベントや動きを先行。画像が登録され、合理化されたビデオは簡単に彼らが時間の経過とともに変化するような動的なタンパク質の局在および細胞型を可視化するために、パブリックドメインソフトウェアを用いて製造することができる。

<html>このメソッドを使用して収集された有益な時間ポイントのセットは、 図3に示します。 30分の時間スケールでの細胞膜はRFP（PM-RB）で標識され、GFPは、その天然のプロモーター下POLARタンパク質に融合されている（POLAR :: POLAR-GFP）6、我々は、タンパク質の局在の変化とともに細胞分裂を参照してください。を前に付けます。気孔の系譜フォーム幹細胞様さらに非対称分裂を受ける能力を保持meristemoids、およびその姉妹細胞、気孔と呼ばれる系統の接地細胞（SLGCs）と呼ばれる気孔の前駆体の非対称分裂。 SLGCsは気孔の前駆体の運命を負うものではありません、彼らは頻繁に舗装細胞への分化転換が、葉が広がるように、最初から離間別メリステモイドを生成するために非対称分裂機能を再開することができる。これらの運命のすべてがPOLARの発現と局在:: POLAR-GFP（ 図3、ビデオ1）に反映されます。 <html> jove_content &quot;のfo：キ...

我々は、気孔の分化を文書化、開発の数日間にわたって表皮の共焦点イメージングのための植物の子葉を固定化するためにチャンバースライドやメディアを使用してプロトコルを記述します。フルオロフォアタグ付きタンパク質は、細胞分裂や細胞型分化の過程でそれらの可能な役割の理解を深め、表現と細胞内局在によって動的に追跡することができます。

発生過程における細胞挙動の生体内（in vivo）ダイナミクスをイメージングすることは、組織のメカニズムを理解するための強力な手法となり得ます。

本実験の目的は、種子発芽後の表皮発達の初期段階における現象を細胞レベルで可視化することである。まず、種皮を除去して子葉（kosin）を明確に観察できるようにし、次に子葉をアガロース培地の下に固定して、その発達をサポートしながら固定する。その後、数日間にわたってタイムラプスイメージングを行い、表皮細胞の成長と分裂をin vivoで観察する。可視化された蛍光に基づき、動的な遺伝子発現とタンパク質の局在を示す結果が得られました。Gus染色の静止画やGFP融合タンパク質などの既存の手法に対する本手法の主な利点は、細胞分裂および分化におけるタンパク質の動的な移動を観察できる点にあります。本実験に使用するArabidopsisの種子は、33%家庭用漂白剤と0.1%Triton X 100で調製した種子滅菌溶液で滅菌します。目的の蛍光レポーター構築物および遺伝子型を持つ種子を1.7 mLチューブに入れ、1 mLの滅菌溶液を加え、ミキサーで15分間インキュベートします。滅菌フード内で、ピペットを使用してチューブから種子を残しつつ滅菌液を除去します。1 mLの滅菌水で洗浄します。この洗浄操作を4回繰り返します。4°Cで2日以上インキュベートします。チャンバースライドを準備するには、200 mLフラスコに0.5%のbact to agar水溶液を20 mL量り取り、溶解するまで電子レンジで加熱します。溶液が沸騰する際は注意してください。溶液を約60°Cまで冷却します。溶液が高温すぎたり、急激に滴下したりすると、接着剤が溶けたりチャンバースライドのガラスにひびが入ったりする可能性があります。アガロース溶液が十分に冷却されたら、ピペットで1 mLを採取し、すぐにチャンバースライド内のカバーガラスにゆっくりと滴下してください。アガロース溶液をさらに1 mL加えます。チャンバースライドの底面がアガロース培地で完全に覆われている必要があります。この最小限の培地で水分を維持し、ガスの拡散を可能にすることで、植物性オレインに含まれる蓄積栄養素により4〜5日間の発育を維持するのに十分です。チャンバー付きスライドをベンチトップに置きます。この手順を開始するために、4 °Cで保存していた滅菌済み種子のチューブを取り出します。解剖顕微鏡のステージ上にペーパータオルを置き、水で湿らせて平らな面に調整します。この組織は、解剖中に種子を固定するために使用します。チューブから20〜30個の種子をピペットで組織上に移し、解剖顕微鏡の視野内に配置されるよう注意してください。本手順において、子葉の解剖が最も困難な工程です。低倍率の顕微鏡と鋭いピンセットを用い、細心の注意を払って操作することが、解剖を成功させる鍵となります。鋭いピンセットを使用して、内部の苗から種皮を慎重に取り除きます。この際、外珠皮と内珠皮の両方を完全に取り除かなければなりません。次に、メスを用いて、子葉を上胚軸および根から切り離します。イメージングに際しては、ハイパーコット（hyper cot）と根端（radical）を除去することが有益です。なぜなら、そのままの状態ではハイパーコットが劇的に直線化し、伸長するためです。解剖したコスリーディン（cos leadin）をタイムラプス撮影の視野外に移動させ、水に浸したまま保持します。目的の数のオリアン（Olean）が得られるまで、種子の解剖を繰り返します。chamber slideにcotanを固定する前に、15回から20回程度の解剖に習熟することが推奨されます。chamber slideをcotanの固定準備として、小さなカバーガラスを用いてアガロース培地を切り、chamberのガラス底面から層全体を持ち上げます。保持チューブから少量の水と共に、解剖したcotanをピペットでchamber内へスライドさせます。持ち上げたアガー層の下にスライドさせます。アガーをゆっくりと沈殿物の上に下ろします。余分な水分がある場合は、ティッシュで吸い取ってください。封入が完了した際は、堆積物を乱さないよう注意してください。標本が容易に動かなくなったことを確認します。チャンバースライドにカバーガラスをかけ、スライドを顕微鏡ステージに移動させます。イメージングの前に、目的の蛍光色素を観察できるように倒立共焦点顕微鏡を設定します。LSM 700のパラメータは、GFPの励起および収集に488 nm、バンドパスフィルターに440〜530 nm、RFPの励起および収集に555 nmに設定します。20倍の対物レンズを使用し、570 nmから610 nmのバンドパスフィルターを装着します。ACOのリードインに焦点を合わせ、対物レンズをチャンバーの中央に移動させます。取得モードに切り替え、ズームを0.5に、フレームサイズを48 × 48ピクセルに変更します。「positions」チェックボックスと「scan overview image」を選択し、水平および垂直のタイル数を30から35に増やします。「scan」ボタンをクリックしてスキャンを開始します。スキャンが完了したら、「dimensions」タブの下にある「positions」ボタンをクリックし、観察したい各cot leadにクロスヘアを配置します。固定した標本に損傷がないか確認します。損傷のあるcoss leadinに対応するポジションを削除し、イメージングに適した標本のみを残します。次に、すべてのサンプルのcoss leadin表皮を包含するZシリーズを設定します。Zackのチェックボックスをクリックします。ポジションリストにある各ポジションを選択し、「move to」ボタンをクリックします。表皮にあるcosリードの最上層の平面に焦点を合わせ、Zackの下にある「set first」ボタンをクリックします。表皮が有効に観察できる最低倍率にフォーカスを合わせ、「set last」ボタンをクリックします。「optimal」の隣にあるボタンをクリックすると、設定すべき最適なZスライス厚が表示されます。各kosリードインを確認し、これらの設定がすべてのサンプルを網羅していることを確認します。Zパラメータを個別のポジションごとに設定することはできません。ここで使用しているZen 2009ソフトウェアでは、時系列設定を行います。表皮細胞分裂におけるタンパク質ダイナミクスを観察する場合、3日間にわたって15分から30分の間隔で、希望する解像度と長さのインターバルを設定することが有効ですが、インターバルは必要に応じて変更可能です。「Time series set cycles」の下にある「time series」チェックボックスをクリックし、テキストフィールドに希望する画像数を入力します。「set interval」を30に設定し、プルダウンメニューから「MIN」を選択して、XY, ZTマルチポジションスキャンを開始します。フレームサイズを希望の解像度に変更し、「start experiment」をクリックして収集を開始します。ポジション数はスキャンの仕様によって制限されることに注意してください。総スキャン時間が設定した間隔（interval）より長い場合、タイムポイントが正確に記録されません。このシステムを使用すると、30分間隔で59枚のZスライスにおいてGFPおよびRFPをイメージングする場合、最大6箇所の同時ポジションが可能です。この方法で収集された有用なタイムポイントのセットの例をここに示します。細胞膜はRFPで標識し、極性タンパク質をその本来のプロモーターの下でGFPと融合させています。シリーズAの画像では、極性GFPが当初は均一に分布し、その後、矢印で示される非対称分裂の約2時間前に集積することがわかります。シリーズBでは、47時間目の矢印で示される最初の非対称分裂の後、極性GFPは発生しつつあるmeister OIDの部位から離れるように分離します。その後、極性GFPは両方の細胞から消失します。meris oidによって孔辺細胞母細胞の状態へ急速に移行することが示唆されており、アスタリスクで示された孔辺細胞母細胞は対称的に分裂して孔辺細胞へと分化し、一方でシスト細胞は極性のGFP発現を回復させ、その後おそらく非対称分裂に至ると考えられます。ここでは、1つの気孔前駆細胞の増殖および間隔形成における極性GFP局在の、速度を調整した登録ビデオを示します。当初、発芽から39時間後までに、細胞内で極性GFPが一様に現れます。40時間後の分裂直前に強い極性を示し、細胞の反対側に小さな娘細胞を配置します。右側の大きな細胞も気孔系としてのアイデンティティを回復し、45時間までにGFPの極性局在が気孔前駆細胞の隣に移動します。47時間後の分裂により、左側にある既存の気孔前駆細胞から離れる方向に、右側に新しい気孔前駆細胞が生成されます。最終的に、2つの気孔が1つの細胞によって隔てられた状態になります。このビデオを視聴することで、発芽中の子葉の長期タイムラプス観察を用いて、発達過程における表皮の遺伝子発現およびタンパク質局在を評価する方法について、十分に理解できるはずです。

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のCa 2 +シグナル伝達は、植物において、多様な生物学的プロセスを調節する。ここでは、遺伝的にコード化されたのCa 2 +指標エクオリンまたはCASE12を使用して、シロイヌナズナの細胞および組織内の空間的および時間的のCa 2 +シグナルを誘発した非生物的ストレスを監視するためのアプローチを提示します。...

時空のCaを測定する 2 +シグナル

このプロトコルの目的は、気孔複合体の細胞皮質内に、GFPタグPATROL1、膜輸送タンパク質のドットを点滅示す可変角度落射蛍光顕微鏡で植物細胞表面上の蛍光標識タンパク質のダイナミクスを監視する方法を示すことですシロイヌナズナ 。...

可変角度落射蛍光顕微鏡を用いて植物細胞表面ダイナミクスのリアルタイムイメージング

ライブ共焦点イメージングは​​、開発を研究するための強力なツールと生物学者を提供します。ここでは、 シロイヌナズナの花の開発のライブ共焦点イメージングのための詳細なプロトコルを提示します。...

共焦点イメージングは​​、シロイヌナズナの花の開発のライブ

ここに提示されているのは、高開口数の対物レンズと浸漬媒体としてのパーフルオロデカリンを使用して、最長3日間の根および胚軸発達の高解像度共焦点経時撮影イメージングのための簡単な技術である。...

根および胚軸発達の長期共焦点イメージングのための単純なチャンバー

この資料は、主根と 1 つの光学的平面に根毛を閉じ込めた 2...

二層流体プラットフォームシロイヌナズナ実生の根毛の形態のイメージング

拡張期間にわたってシロイヌナズナ葉の蛍光ライブ...

シロイヌナズナの取付汎用性の高い方法は、生体のタイムラプス イメージングの葉します。

この論文では、気孔の発達を制御する遺伝子を特徴付けるために、表皮剥離を使用しない2つの表現型法について説明します。最初の方法は、トルイジンブルーO染色植物表皮を使用して気孔表現型を分析する方法を示しています。2番目の方法は、気孔リガンドを同定し、それらの生物学的活性を監視する方法を説明する。...

表皮表現型スコアリング による 気孔発生に関与する遺伝子の同定

ここでは、 シロイヌナズ ナの苗木の脱etiolationの初期段階におけるクロロフィル生合成モニタリング用に設計された高度なツールについて説明します。この新しい方法論は、高い空間分解能と時間分解能で非侵襲的なリアルタイムクロロフィル蛍光イメージングを提供します。...

シロイヌナズナ脱etiolationの初期段階におけるクロロフィル生合成速度測定のための非侵襲的アッセイ

学ぶシロイヌナズナ子葉の長期高分解能共焦点タイムラプスイメージング法。アガロース培地で固定し、気孔分化や蛍光タンパク質の動態を数日間追跡。植物表皮発生のリアルタイム解析に有用です。

の長期、高分解能共焦点タイムラプスイメージング

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