Name: マウスで制御子宮裂傷の傷害 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-05-09T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 28 s
Description: 学ぶマウス頸髄裂傷モデル作成法。脊椎固定装置と振動ブレードを用いて0.75mmの精密な背側半切傷を再現可能にし、従来法の問題を解決して軸索再生研究に貢献します。

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このデバイスの開発はLISA㈱、ルイビル、ケンタッキー州によってサポートされていました。またXMXにCBS、およびNIH NS050243、NS052290、そしてNS059622に、ノートンのヘルスケアの継続的なサポートを認めるルイビル、ケンタッキー州。

1。背骨スタビライザーの動物の準備とアプリケーションマウス頸椎は、側面から見た腹凹である。 C3からT1への棘突起は小さく砕けており、一般的に3,4に記載されているようしたがって、脊椎の安定化には ​​適していません。私たちは、脊椎安定化横ファセット固定によって実行されることをお勧めします。固定装置は、横方向に各ファセットにクランプマウスと2つの調整ステンレス製のアームを支持するU字状の金属チャンネルから構成される。これは、ターゲットの椎骨の優れた固定化を提供します。脊椎固定した後、脊椎が若干脊髄のより良好な露光を提供するために、頸椎湾曲を平坦化するために上昇する。 <ol><li>鉗子、microscissorsの2組、30 G針、縫合糸と針ホルダー、皮膚クリップ、クリップアプリケーターの2-3ペア次手術器具を滅菌する。脊椎安定剤を消毒。 Anesケタミン/キシラジン（100ミリグラム/ 10 mg / kg）を腹腔内のカクテルを使用して、マウスをthetize。マウスの首から毛を剃る。 </li><li>ポビドンヨード液を、70％アルコールで皮膚洗浄した後、加熱パッドを温め手術台の上にマウスを移動します。角膜の乾燥を防ぐために、眼軟膏と動物の目をカバーしています。 </li><li>麻酔導入（マウステールピンチに応答しない場合に到達）した後、後頭部から下頚椎の皮下脂肪·パッドに後頸部正中皮膚切開を行います。倍率で、C2で僧帽筋の間に正中切開を行い、頭半棘筋の筋肉を分割。筋肉下の脂肪パッドの識別は正しい層に解剖を容易にします。 </li><li>信頼性のあるランドマークとして機能T2棘突起に尾側正中筋肉解剖を拡張します。 T2の椎骨に付着筋肉をカットし、T2の軟骨部分を除去棘突起。 </li><li>マイクロはさみのペアを使用してT2薄層を通してC2から傍脊柱筋群を解剖。筋肉解剖は棘突起に隣接始まり、椎間関節に両側​​及ぶ。出血を最小限に抑えるために棘突起とラミナ（骨膜層内）に直接隣接する筋肉を分離する。ラテラルファセットが露出された後、LISA段のU字型チャネル上にマウスを置きます。 </li><li>両側の面の下にさらさステンレスアームを取り付けます。腕が所定の位置にしたら、背骨を固定する鋼アームのつまみネジを締めます。これは、ターゲットの椎骨をしっかり固定を維持し、優れた露出を提供しています。アームは、脊椎の正確な水平配向を提供するように調整することができる。 </li><li>硬膜の基礎となる公開するC5とC6の間に黄色靱帯を切開。層間空間との間、microscissorsがに配置されるときに通過する小durotomyを作成するために30 G針を使用durotomyを拡張します。脊髄は、現在制御された病変裂傷を受けるように調製される。 </li></ol> 2。 LISAデバイスを使用した子宮頸脊髄裂傷<ol><li>頸髄拡大の幅が異なるレベルに変化する。 2.3ミリメートルフラットブレードを使用してC5-6で背片側切断病変を作り、脊髄の幅全体をカバーするために振動の振幅を設定します。ブレードはファイン科学ツール社（フォスターシティ、カリフォルニア州）から入手し、脊髄の裂傷のために変更されています。低い振幅レベルがコード裂傷のしやすさを減少するように、≥0.5ミリメートルでブレード振動の振幅を維持します。 </li><li> LISAの舞台で背骨の安定やマウスを置きます。ブレードは運動の3つの範囲が可能なマイクロドライバにより制御される地位にLISAに取り付けられている。 LISAとその機能の構成要素は、 図1に記載されている。 </li><li>電源にあるブレード·振動スイッチを。のmagnif下icationは、露出した脊髄を振動刃の直下に配置されるようにマウスを移動します。 </li><li>振動ブレードに向かってマウスをサポートしている段階に昇格。ブレードはかろうじて脊髄の背静脈に触れたときに &quot;0&quot;の位置が記録される。 &quot;0&quot;の位置に相対的な脊髄裂傷の深さを測定します。 </li><li>マイクロドライバ制御によるステージ位置を高める：マイクロドライバーノブの360°ターンは0.25ミリメートルでのステージを高めます。従って、0.75ミリメートル背側片側切断損傷部は、マイクロ·ドライバー·ノブを3回回すことによって作成される。病変の精度は±0.01 mmである。ブレードが脊髄を裂くし始めると、生理食塩水灌漑で手術野に注油してください。脊髄の切り込み深さは、縦マイクロドライバによって制御され、視覚的な指導とは無関係です。 </li><li>所定の深さに達すると、振動スイッチをオフにしてください。理想的には、揺動刃リットルに配置されている組織変形の証拠なしesionギャップ。切刃から段階を下げ、綿綿棒を使用して術野からの血液や生理食塩水を削除します。止血には、&lt;1分で自然に発生します。 </li><li>脊椎スタビライザーからマウスを離します。おおよそ6-0絹縫合糸を使用した傍脊柱筋とステンレスミシェルクリップを使用して皮膚創傷を閉じます。 </li></ol> 3。アニマルケア<ol><li>皮下に十分な水分補給を維持し、意識を取り戻しつつ加熱パッドに回復ケージにマウスを置いて1〜2ミリリットルの生理食塩水の合計を注入。 </li><li>水や柔らかい食品アドリブを提供し、術後48時間鎮痛薬を投与する。脊髄の背側片側切断後の膀胱心配する必要はない。 </li></ol>

<ol><li>Blackmore, M., Letourneau, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+within+maturing+neurons+limit+axonal+regeneration+in+the+developing+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Changes within maturing neurons limit axonal regeneration in the developing spinal cord.</a> J. Neurobiol. 66 (4), 348(2006).</li>
<li>Blackmore, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kruppel-like+Factor+7+engineered+for+transcriptional+activation+promotes+axon+regeneration+in+the+adult+corticospinal+tract%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Kruppel-like Factor 7 engineered for transcriptional activation promotes axon regeneration in the adult corticospinal tract.</a> Proc. Natl. Acad. Sci U.S.A. 109 (19), 7517(2012).</li>
<li>Carbajal, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+transplantation+of+mouse+neural+stem+cells+into+the+spinal+cords+of+mice+infected+with+neurotropic+mouse+hepatitis+virus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Surgical transplantation of mouse neural stem cells into the spinal cords of mice infected with neurotropic mouse hepatitis virus.</a> J. Vis. Exp. (53), e2834(2011).</li>
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<li>Ramer, M. S., Harper, G. P., Bradbury, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progress+in+spinal+cord+research+-+a+refined+strategy+for+the+International+Spinal+Research+Trust%5BTitle%5D)+AND+%22Spinal+Cord%22%5BJournal%5D)">Progress in spinal cord research - a refined strategy for the International Spinal Research Trust.</a> Spinal Cord. 38 (8), 449(2000).</li>
<li>Seitz, A., Aglow, E., Heber-Katz, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recovery+from+spinal+cord+injury%3A+a+new+transection+model+in+the+C57Bl%2F6+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Res%22%5BJournal%5D)">Recovery from spinal cord injury: a new transection model in the C57Bl/6 mouse.</a> J. Neurosci. Res. 67 (3), 337(2002).</li>
<li>Sivasankaran, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PKC+mediates+inhibitory+effects+of+myelin+and+chondroitin+sulfate+proteoglycans+on+axonal+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">PKC mediates inhibitory effects of myelin and chondroitin sulfate proteoglycans on axonal regeneration.</a> Nat. Neurosci. 7 (3), 261(2004).</li>
<li>Yu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibitor+of+DNA+binding+2+promotes+sensory+axonal+growth+after+SCI%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Inhibitor of DNA binding 2 promotes sensory axonal growth after SCI.</a> Exp. Neurol. 231 (1), 38(2011).</li>
<li>Zhang, Y. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dural+closure%2C+cord+approximation%2C+and+clot+removal%3A+enhancement+of+tissue+sparing+in+a+novel+laceration+spinal+cord+injury+model%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosurg%22%5BJournal%5D)">Dural closure, cord approximation, and clot removal: enhancement of tissue sparing in a novel laceration spinal cord injury model.</a> J. Neurosurg. 100, 343(2004).</li>
</ol>

<ol><li>いくつかの著者は（YPZ、XMX、CBS）ルイビルインパクシステム株式会社の金融関心を持っている</li><li>著者、李平張、リサBEシールズ、そしてクリストファーB.シールズは、ノートンヘルスケア、ルイビル、ケンタッキー州の従業員です。他の著者は、IN、インディアナ大学、インディアナ州で採用されています。 </li><li>著者は、この記事で利用試薬や楽器を生産する会社からの資金を受け取りませんでした。 </li></ol>

脊髄への裂傷の傷害の前に椎安定化が棘突起の固定によって得られた。マウスのT1を通してC3から砕けやすい短い頚椎棘突起へのクランプの頸椎前湾カーブと添付ファイルの両方が効果的な脊椎安定化を防ぐ。さらに、手動制御の下で利用カミソリの刃やmicroscissorsの使用は6病変の深さの変動を作成する重要な組織の変形を引き起こす。これは、特定の経路の軸索再生が研究され、特にデータの誤った解釈につながる可能性があります。背側皮質脊髄路が完全lesioning時に離断されていない場合、例えば、免れる背側皮質軸索が再生軸索として誤解されることがあります。これらの課題は、単一レベルおよび脊髄の正確なlesioningにおけるファセットに固定するとともに脊椎安定化装置を使用することによって克服することができる。また、ああを使用IGHの周波数振動ブレードは、隣接脊​​髄を粉砕またはcontusingなし鋭い裂傷を生成します。この方法は、マウス6の胸部脊髄裂傷を生成するための後続の修正を、ラット9,12,14における脊髄裂傷の傷害を生成するために使用されている。本通信では、マウスにおける信頼性子宮頸部病変裂傷を作成する方法を説明する。 脊髄の前後径は、マウスで&lt;2mmである限り、裂傷病変の正確な深さは信頼性のある実験モデルを作成する上で不可欠です。病変の深さの最小の変動性が大きく軸索再生と同様に、体積や行動の研究を評価する実験の結果を変更します。我々は、切断ブレードの位置を制御する高精度のマイクロドライバを使用したため、この方法を用いて病変部の深さの精度は±0.01 mmである。この方法はで矛盾を減少している裂傷SCIを作成する他のモデルでエラン。この方法は、このような皮質脊髄路、赤核脊髄路、および背側大動脈路として脊髄の背側半分に位置し、長い脊髄経路の軸索再生の研究に特に便利です。この方法では、これらの繊維路が完全かつ確実に切開することができる。この点において、データの解釈の誤差することにより、SCIに関する実験的研究の報告の信頼性を向上させる、最小限に抑えられる。 要約すると、我々は、マウスにおける頸髄裂傷の傷害のin vivoモデルにおいて再現を作成するための新規な技術を記載している。この手法は、振動ブレードを使用して脊髄の子宮頸部の側面と裂傷の固定により、脊椎安定化に基づいています。マウス6の背側胸部脊髄裂傷モデルでは、このメソッドを使用して、我々は裂傷の深さ、組織型との間に緊密な相関関係を示した、と行動回復。そのような技術はまた、いくつかの他の研究室2,12によって信頼性があることが見出されている。

遺伝子改変マウスの可用性は、SCIのメカニズムの役割を果たす特定の遺伝子の影響を識別するための強力なツールです。裂傷SCIこれは損傷8以下の効果的な治療を提供することができる治療薬または分子を調べるために使用される重要なモデルである。マウスで裂傷の傷害の作成 ​​時に棘突起の固定が原因で脊椎固定5,11の維持に関与して薄くて壊れやすい棘突起を把握するのが困難に不正確である。わずか0.2ミリメートル（マウス脊髄の直径の10％）の裂傷の深さのばらつきは、データの解釈を誤解を招く原因となる。脊髄裂傷病変の性質と程度を正確に10を定義する必要があります。この課題に対処するため、我々は、椎安定からなる新規技術を開発し、ルイビル傷害システム装置に接続されている製作のブレードを使用している（LISA）が裂傷SCI 7,14を生成する。この損傷は、裂傷プロセスの間、組織の変形を回避鋭い振動ブレードを使用して作成された。裂傷の深さは、裂傷の深さを制御するマイクロドライバを使用して0.01ミリメートルの精度に精密だった。カッティングブレードは希望裂傷輪郭9を作成するには 、特定の形状や幅に、カスタムメイドされています。我々は、1）頚椎露光、2の方法）両側性ファセット固定装置を用いて椎安定化する技術、及び振動ブレードを用いて子宮頸部裂傷損傷の3）の作成を示す。

<table><tbody><tr><td>マウス脊椎安定剤</td><td>ルイビルインパクターシステム</td><td></td><td>頸椎を安定させ、露出</td></tr>させる <tr><td>LISA vibraknife </td><td>ルイビルインパクターシステム</td><td></td><td>頸髄の裂傷を引き起こす</td></tr><tr><td>スプリングシザーズ</td><td>ファインサイエンスツール (米国)</td><td>15013-12</td><td>皮膚と僧帽筋の切開</td></tr><tr><td>スプリングシザー</td><td>ス ファインサイエンスツール (米国)</td><td>15023-10</td><td>椎弓板から筋肉を分離</td></tr>する <tr><td>春はさみ</td><td>ファイン サイエンス ツール (米国)</td><td>15002-08</td><td>硬膜の切開</td></tr><tr><td>グレーフ鉗子 </td><td>ファイン サイエンス ツール (米国)</td><td>11154-10</td><td>皮膚を引っ込め</td></tr>る <tr><td>デュモン #7 鉗子 </td><td>ファイン サイエンス ツール (米国)</td><td>11274-20</td><td>筋肉の収縮 (先端が修正された)(図.A)</td></tr><tr><td>デュモンSS鉗子</td><td>ファインサイエンスツール(米国)</td><td>11203-25</td><td>椎骨の固定(先端修正)(図B)</td></tr><tr><td>30G針</td><td>ベクトンディッケンソン</td><td>305106</td><td>硬膜開口部を作成する</td></tr><tr><td>6-0縫合</td>糸<td>エチコン</td><td>8806H</td><td>筋肉と筋膜層を閉じる</td></tr><tr><td>創傷クリップ</td><td>ファインサイエンスツール(米国)</td><td>12031-07</td><td>皮膚閉鎖</td></tr><tr><td>トリブロム&#8211;thanol (Avertin)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>90710-10G</td><td>麻酔薬</td></tr><tr><td colspan="4">Louisville Impactor System, Inc, 210 E. Gray St., Suite 1102, Louisville, KY 40202, (502) 629-5510, E-mail: <a href="mailto:cbshields1@gmail.com">cbshields1@gmail.com</a> Fine Science Tools (USA), Inc、373-G Vintage Park Drive、フォスターシティ、CA 94404-1139、(800)521-2109、Eメール:<a href="mailto:info@finescience.com">info@finescience.com</a> Becton Dickenson、1 Becton Drive、Franklin Lakes、NJ USA 07417、(201)847-6800 Ethicon、Route 22 West、Somerville、NJ 08876 1-877-ETHICON Sigma-Aldrich Corp. St. Louis、 MO、米国、63178(314)771-5765、電子メール:cssorders@sial.com<</td></tr><tr>td colspan="4">Figure Aは、変更されたデュモン#7鉗子です。BはデュモンSS鉗子を改造したものです。</td></tr></tbody></table>

マウスで制御子宮裂傷の傷害

Controlled Cervical Laceration Injury in Mice

遺伝子改変マウスの使用は、脊髄損傷（SCI）など、いくつかの神経疾患の根底にある分子機構の理解を向上させます。 SCIの裂傷モデルを生成するために使用されるフ​​リーハンド手動制御は、多くの場合、クラッシュまたは挫傷コンポーネントと、それゆえ、新しい技術が開発されたものに関連付けられている一貫性のない怪我を作成します。我々の子宮頸部裂傷SCIのモデル1を組み込むことにより、フリーハンド方式に固有​​の困難を解決した）椎骨ファセット固定によって頚椎安定化、2）強化された脊髄露出、と振動ブレードを使用して脊髄の再現可能な裂傷の3）の作成関連する挫傷せず、深さ±0.01ミリメートルの精度。このようなメスやはさみのフリーハンドの使用などのSCI裂傷を作成する標準的な方法に比べて、我々の手法は、一貫した病変を生産している。このメソッドはcorticospの軸索再生の研究に有用ですinal、赤核脊髄、そして背昇順広大。

ターゲット椎骨の固定化は、マウス脊髄の正確な病変を生成する際に非常に重要である。我々の脊椎安定化装置は、短い棘突起とマウス頸椎の腹側前弯の解剖学的な問題を克服する。頸椎は、我々頸椎安定します（ 図2）を使用して公開されます。我々のマウスの脊椎安定化装置は、頸髄手順については、背骨を製造するための信頼できる技術である。 LISAを使用して病変の深さは0.01ミリメートル6,13に正確です。正確な裂傷は、病変/組織インターフェース（ 図3）全く挫傷を引き起こしません。背片側切断病変の精度が0.9ミリメートル深い裂傷がちょうど脊髄1の病理セクションによって確認各標本における中央運河を超えて拡張する軸索再生に関する研究にC57BL / 6マウスで実証された。これらの動物のすべての歩行を回復この脊髄裂傷損傷後のED。 <img alt="図1" src="/files/ftp_upload/50030/50030fig1.jpg" /> 図1（A）LISAステージに載置された脊椎安定化剤でマウス。振動ブレードが引き裂かれる脊髄に向けられている。微小駆動制御は、ステージの下に配置され、適切な部位でマウスを位置決めするように設計されている。垂直マイクロドライバが病変の深さを制御し、チルトノブが裂傷の角度を防ぐために脊髄の水平面を制御する。オン·オフスイッチは、振動モータを制御し、別のノブは、その振幅を調整します（B）0.75ミリメートル背片側切断の裂傷病変が完全に層のアーチの下にカット。 <img alt="図2" src="/files/ftp_upload/50030/50030fig2.jpg" /> 図2。 </st栄&gt;（A）U字型チャネルと両腕とコネクタで構成され、マウスの脊椎スタビライザー。マウスは子宮頸部SCIに使用Cトラフや胸部SCIのためのTトラフに配置されます（B）頸椎がラテラルファセットの下に腕を置いた後、親指のネジをロックすることによって固定されています。硬膜、骨のいずれかの取り外しなしC5-6のラミナ、C6-7、およびC7-T1の間に露出されています。 <img alt="図3" src="/files/ftp_upload/50030/50030fig3.jpg" /> 図3 0.5の深さ、0.8、1.1、および矢状ビュー（シミクレ紫とエオシン）で観察された1.4ミリメートルで4背側脊髄裂傷は、この手法を用いた高精度を描いた。

再現性を作成するための新たな手法<em生体内で&gt;</emマウスにおける頸髄損傷の裂傷&gt;モデルが記載されている。この技術は、±0.01程度の精度で振動ブレードを用いて脊髄の頸部のファセット及び裂傷の固定により、脊椎安定化に基づいている。

Use of genetically modified mice enhances our  understanding of molecular mechanisms underlying several neurological disorders  such as a spinal cord ...

本実験の全般的な目的は、マウスの脊髄に再現性のある裂傷病変を作製することである。これは、動物をLouisville損傷システム装置に配置し、頸椎椎弓を後方から露出させることで達成される。第二のステップとして、特別に設計された安定化デバイスを用いて、マウス脊髄の標的椎体を固定する。次に、黄色靭帯を末端から除去した後、椎弓間の標的となる脊髄を特定します。振動ブレードとマイクロドライバーを使用して、深さ0.75 millimetersの頸髄背側半切を精密に作成します。我々の研究室で開発したこの手法の最大の利点は、脊髄挫傷を非常に正確に再現できる方法を構築したことです。これは重要です。なぜなら、これまでに使用されてきたハサミやメスなどの手法は、不完全で不正確な脊髄損傷モデルとなり、問題を引き起こしてきたためです。現在では、脊髄の挫傷、切断デバイスから脊髄が逃げることによる変位、および脊髄損傷時に発生する過剰な出血を回避する方法があります。この手法を用いることで、脊髄損傷の深さを目視で推定する方法を避け、非常に精密な手法を確立することが可能になります。この手法を用いることで、切断モデルにおける実験的脊髄損傷の方法を刷新できると考えており、これは軸索再生において本質的に重要であるだけでなく、脊髄損傷の治療法の発見にも寄与する可能性があります。本手順の実演は、当研究室の脳神経外科研究員である脳神経外科医のJangが行います。まず、以下の手術器具（ピンセット2〜3ペア、マイクロ剪刀3ペア、30ゲージ針、マイクロURS縫合糸、針持、スキンクリップ、およびクリップアプリケーター）を滅菌させてから、この手順を開始してください。次に脊髄固定装置を消毒し、その後、ケタミン、キシラジン、またはトリエタノールのカクテルを腹腔内投与してマウスを麻酔します。次に、マウスの首の毛を剃ります。ポビドンヨード溶液と70%alcoholで皮膚を洗浄します。その後、あらかじめ温めておいたヒーティングパッド付きの手術台にマウスを移動させます。角膜の乾燥を防ぐため、眼に眼科用軟膏を塗布します。麻酔導入後、後頸部の正中線に沿って、皮膚から下位頸椎の皮下脂肪層まで皮膚切開を行います。顕微鏡下で、C2レベルの僧帽筋間で正中線皮膚切開を行い、semispinalis capitis musclesを外側に牽引します。次に、信頼できる指標となるT2棘突起まで、正中線の筋肉の剥離を慎重に広げます。T2棘突起から筋肉を分離します。その後、T2棘突起の軟骨部分を除去します。その後、マイクロ鋏を用いて、C4からT2まで両側の椎弓から脊柱起立筋を剥離します。剥離は棘突起の隣から開始し、両側の椎弓を経てfacet jointsまで広げます。側突起が露出した後、マウスをマウス脊髄固定具のU字型チャンネルに配置します。次に、マウス固定具のステンレス製アームを、露出した面の両側に配置します。アームを設置したら、ステンレス製アームのサムネジを締め、顕微鏡下で脊椎を固定します。C5とC6の椎板弓の間の黄色靭帯を除去し、椎間腔の直下にある硬膜を露出させます。30ゲージの針を用いて小さな硬膜切開を行い、マイクロ鋏でその切開部を広げます。これで、脊髄に制御された裂傷病変を導入する準備が整いました。この手順では、脊髄安定装置とマウスをLouisville損傷システム装置のステージ上に配置します。このステージにはブレードが取り付けられており、マイクロドライバーによってその位置が制御されます。オシレーターに2.3 millimeterのフラットブレードを取り付け、C5〜6椎弓の間で背側HEMI切断病変を作成するために3方向の可動域で操作します。振幅を0.5 millimeterに設定してください。振幅が低いと、脊髄を完全に切断することが困難になる場合があります。その後、顕微鏡下でブレード振動機のスイッチを入れ、マウスの脊髄を振動するブレードの直下に配置します。次に、マイクロドライバー制御を用いて、ステージを振動刃に向かって上昇させます。刃が脊髄の背側静脈にわずかに触れた位置をゼロ点とし、脊髄切断の深さはこのゼロ点からの相対距離で測定します。その後、マイクロドライバー制御でステージの位置を上昇させます。マイクロドライバーノブを360度回転させると、ステージが0.25 mm上昇します。したがって、マイクロドライバーノブを3回回すことで0.75 mmの背側半切断病変を作成します。ブレードが脊髄を裂傷し始めると、生理食塩水の灌流で手術野を潤滑してください。あらかじめ設定した深さに達したら、バイブレーターのスイッチを切り、マウスを支持しているステージとクランプをカッティングブレードから遠ざけるように下げてください。手術部位を生理食塩水で洗浄し、血液を除去します。通常、1分以内に止血されるため、綿棒で患部を拭いて乾燥させます。最後に、マウスを脊椎固定具から取り出し、ステンレスステープラーで皮膚を閉じます。Michelleクリップを使用します。この図に示すように、アームを外側関節突起の下に配置し、サムスクリューを固定することで頸椎を固定します。骨の除去を行うことなく、C5-6、C6-7、およびC7-T1の椎板間で硬膜を露出させます。ここでは、深さ 0.5, 0.8, 1.1, および 1.4 mm における4か所の脊髄背側切創の矢状面像を示します。これらは、この手法を用いることで非常に高い精度が得られることを示しています。脊髄損傷モデルの作成において、これまで固有の課題となってきたのが、頸椎の固定不足でした。当グループで開発した脊椎安定化装置を使用することで、現在は頸椎を完全に固定することが可能となっています。これにより、脊髄挫傷、脊髄内注入、および脊髄への細胞移植を用いた脊髄損傷モデルの作製が可能となり、あらゆる脊髄研究の手法への応用が期待されます。

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マウスにおける実験的心筋梗塞を誘発するために用いる外科手術は、心臓や肺の左前方の表面を可視化するために、3番目と4番目のリブの間に左開胸で始まります。左冠動脈を結紮され、胸が閉じているとマウスが自発的に回復させる。...

マウスにおける冠動脈結紮のために修飾されたテクニック

出典: Gao, Z., et al.交差神経伝達手術のための脊髄前経路を介した直接吻合のマウスモデルJ. Vis.

マウスの前肢可動性を回復するための頸部神経の直接再接続

我々は、再現性を高めるために左前下行枝（LAD）に結紮の位置決めにおいてより明確にするために可能にするマウスモデルにおける心筋梗塞（MI）をシミュレートするための実験的虚血/再灌流（I / R）傷害を誘導するための外科的方法を紹介マウスでのMIの実験の。...

左前下の動脈の結紮を通して心筋虚血再灌流傷害のマウスモデル

光血栓症は、脊髄に限局性虚血を誘発する低侵襲で再現性の高い手順であり、マウスの脊髄損傷のモデルとして機能します。...

マウスの脊髄損傷のモデルとしての光血栓誘発性局所虚血

私たちは、成体マウスにおいて一貫して厄介な脊髄損傷を生じさせることができる組織変位ベースの偽性脊髄損傷モデルを紹介する。...

マウスにおける組織変位ベースの脊柱挫傷モデルの検討

このプロトコルは、脊髄損傷研究のための最小限の副次的損傷で、マウスモデルにおける安定したトランセクション型脊髄損傷の誘導のための正確なラミネクトミーを作成する方法を記述する。...

マウスにおける完全なトランセクション型脊髄損傷の誘導

脳挫傷を伴う実質内出血や神経炎症は、重度の二次性脳損傷を引き起こす可能性があります。このプロトコルは、マウス制御皮質衝撃(CCI)モデルの詳細を詳述しており、研究者は出血、挫傷、心的外傷後免疫応答を研究し、潜在的な治療法を探求することができます。...

外傷性出血挫傷および神経炎症に対する前臨床制御皮質衝撃モデル

ここでは、単純な縫合糸とクランプを用いた一過性両側共通頸動脈閉塞によるレチナル虚血のマウスモデルについて述べている。このモデルは、心血管異常によって引き起こされる虚血の病的メカニズムを理解するのに有用である。...

一過性両側性頸動脈閉塞による虚血性筋炎損傷のマウスモデル

低侵襲技術とシンプルな実験装置は、実験動物への手術損傷を減らし、解剖学的形態の維持を可能にすることにより、脊髄損傷モデルの再現性を向上させます。信頼性の高い結果と再現可能な手順により、病気の修復のメカニズムの調査が容易になるため、この方法は価値があります。...

低侵襲法に基づくマウス挫傷脊髄損傷モデルの確立

マウスの中枢索症候群(CCS)をシミュレートする本プロトコルは、解剖学的構造を過度に破壊することを回避し、実験動物への再現性を向上させ、操作の損傷を最小限に抑えました。この研究の戦略は、一貫した結果を生み出すことで損傷メカニズムの研究を可能にするという点で有利です。...

C57BL/6Jマウスにおける中枢性臍帯症候群モデルの確立

このプロトコルは、マウスモデルで子宮損傷を誘発する手順を説明し、その後の妊娠中に下流の分析を行います。...

外科的子宮損傷とその後の妊娠転帰のマウスモデル

学ぶマウス頸髄裂傷モデル作成法。脊椎固定装置と振動ブレードを用いて0.75mmの精密な背側半切傷を再現可能にし、従来法の問題を解決して軸索再生研究に貢献します。

マウスで制御子宮裂傷の傷害

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