2013年2月10日
我々はドブタミンにより誘導され、正常マウスにおける心臓カテーテル検査によって監視心臓ストレステストを実行するためのプロトコルを記述します。また、我々は、高脂肪食誘発肥満マウスでは無症候性心疾患のマスクを解除するために、そのアプリケーションを示しています。
ドブタミンによって誘発され、マウスの心臓カテーテル法によって監視される心臓負荷試験。この動画では、ドブタミンによって誘発され、正常なマウスで行われた心臓カテーテル法によるモニタリングによる心臓負荷試験について、順を追って説明します。また、高脂肪食誘発性肥満マウスの無症候性心疾患のマスクを解除するためのその応用についても説明します。
麻酔をかけたマウスを温度調節プレートの上に置きます。酸素供給はプラスチックチューブを介して投与され、心臓カテーテル法のために直腸プローブを使用して体温が監視されます。閉鎖胸部手術では、カテーテルの先端にある圧力センサーを介したアクセスが動脈に入るのに十分なほど細いため、頸動脈が使用されます 動脈圧を測定する。
カテーテルは約10ミリメートル導入されます。動脈圧の波形はこんな感じ。心室圧を測定するには、カテーテルはER直進経路をたどり、大動脈弁を通過して心室まで到達する必要があります。
圧力センサーがドブタミンを投与するために心室に入ると、圧力波形が変化します。プラスチックチューブが頸静脈に導入されます。薬物は、段階的なモードで溶液の量を増やすプログラムされたポンプから注入されます。
心臓負荷試験は、心臓のパフォーマンス評価中の心臓内のドブタミンの変力および時間栄養効果に基づいています。ダブルドメイン刺激は、正常な心臓の臨床疾患を治療するための強力なツールです。状態は検出できません。
ここからは、Sとインストゥルメントのセットアップ方法、心臓カテーテル法とドミン注入の方法、データの収集と分析の方法をご紹介します。示されているすべての動物プロトコルは、ftaの倫理委員会によって承認されました。ドブタミン注入液を調製すると、ドブタミンストック溶液のアリコートが希釈されます。
0.9%塩化ナトリウムでミリリットルあたり500マイクログラム。作動溶液の濃度は、体重×0.2に等しいドブタミンマイクログラム/ミリリットルの式を使用して計算されます。1ミリリットルの29ゲージ×ハーフインチのシリンジを満たし、20センチメートルのP10チューブをシリンジ針に挿入します。
製造手順に従って、輸液ポンプのシリンジを調整します。ランプ注入をステップツーステップ形式でセットアップし、ステップごとに毎分10マイクロリットルの増加で、この場合は6ステップです。圧力センサーの準備。
信号のドリフトを最小限に抑えるために、圧力センサーを摂氏37度の水に少なくとも15分間浸します。静水圧が圧力センサーに電子的に影響を与えるのを防ぐために、カテーテルを0.5センチメートル以上の深さに浸さないでください。圧力センサーを25ミリメートルと100ミリメートルで校正します。
水銀の電気入力は、ミリメートル水銀単位単位の圧力信号に変換されます。サンプリングレートを 2000/秒に設定し、カットオフを 100 ヘルツにしてフィルターローパスを使用します。圧力信号を 0 ミリメートルに設定します。水銀。
カテーテルの先端から15ミリメートルのところに印を付けます。カテーテルを導入するときは、左心室にどれだけ近いかを知ることをお勧めします。カテーテル法のためのマウスを準備し、動物は体重に応じて1グラムあたり60マイクログラムのケタミン、および1グラムあたり4マイクログラムのキシラジンで麻酔されます。
次に、電気カミソリで首を剃ります。麻酔をかけたマウスを温めた等温加熱プレートの上に仰臥位に置きます。手足を紙テープで固定します。
プローブにワセリンを使用。導入をお勧めします。直腸プローブをそっと挿入して体温を監視します。
つま先をつまんで、完全な鎮静を確認します。体温が摂氏37度プラスマイナス0.5度と異なる場合は、加熱プレートで調整してください。マウスの鼻を酸素供給の近くに置きます。
酸素の流れを3ポンド/平方インチに調整します。マウスの首の領域を実体顕微鏡の下に置きます。心臓カテーテル法。
顎の近くの右側をハサミで小さく切開します。皮膚の筋肉結合組織を分離します。気管の右側で縦方向の解剖を行います。
結合組織、脂肪、筋肉を湾曲した鉗子で分離し、気管近くの右頸動脈を露出させます。動物の右側にエキスパンダーを配置して、頸動脈を露出させます。暗赤色の頸静脈が右側にあります。
心臓によって生成される拍動圧は、動脈の識別を容易にします。湾曲した鉗子で動脈を隣接する組織から分離します。白い糸に似た迷走神経は動脈に沿って横たわっています。
20センチメートルの6本のOTTシルク糸を切り、それを2倍にします。動脈の下に二重糸を左から右に通します。別々の端を得るために糸をカットします。
動脈の下に3本目の糸を通します。頭の近くに配置された糸にしっかりと結び目を作り、より遠位の距骨に緩い結び目を作ります。真ん中で結び目。
真ん中の糸の右端を紙で加熱パッドに通して固定します。テープは止血クランプで下の糸を伸ばします。頸動脈を塩化ナトリウムの滴で湿らせてください。
余分な液体を綿棒で乾かします。止血ハサミの位置を固定するには、腹部の皮膚をつまみ、血流を遮断するために上部の糸を伸ばします。動脈の周りの結合組織が除去されたことを確認します。
動脈は血液で満たされている必要があり、脈拍があってはなりません。ねじ山が動脈にトルク力を発生させるのを防ぎます。動脈の底近くにバナスマイクロハサミで断面を切り込みます。
カテーテルを頸動脈に挿入します。必ず圧力センサー全体を導入してください。失血がないことを確認します。
カテーテルを所定の位置に保持するために、真ん中の糸の結び目をそっと調整します。力を入れすぎないでください。圧力センサーは非常に壊れやすいです。
動物から止血ハサミを離します。腹。カテーテルを手で持ち、真ん中の糸を押します。失血を防ぐために、動脈は血液でいっぱいでなければなりません。
圧力信号の記録を開始します。1つのチャンネルを圧力トレースに、もう1つのチャンネルを心拍数登録に選択します。ラダーには、オプション「周期的測定」を選択し、測定をレートとして設定します。
カテーテルが内側にあるとき、動脈圧信号は70ミリメートルから110ミリメートルまで変動します。水星、この時点で興味がある場合は、動脈圧を節約できます。カテーテルをそっと押し上げて、圧力信号の形状の変化を観察します。
カテーテルが左心室の内側に入ると、圧力信号はゼロから100、120ミリメートルまで変動します。水銀は、呼吸数、体温、麻酔レベル、圧力信号を継続的に制御し、それらすべてが安定している必要があります。ドブタミンの注入。
頸静脈カニューレ挿入術の場合は、穿孔を防ぐために、静脈の周りの脂肪組織を必ず剥がしてください。静脈閉塞の外科的処置は、頸動脈に対して示される手順と似ています。PE 10チューブを静脈に導入します。
後ろに下がって血流が妨げられていないことを確認します。輸液ポンプドブタミン滲出液を備えたシリンジプランジャーは、毎分10マイクロリットルから始まり、毎分60マイクロリットルで終了します。各ステップで、注入速度は2分間維持されます。
ドブタミン刺激後、動物は麻酔の過剰摂取で安楽死させます。データ分析。データ分析の場合は、記録されたデータの関心のあるセクションを選択します。
時間間隔を必ず考慮してください。圧力信号が安定しているように見える場合は、血圧モジュールのセットアップアイコンを選択し、選択した圧力信号のタイプを自動的に示します。ソフトウェアは、選択した圧力トレースの特性を説明するパラメータの最大値と最小値を表示します。
さらに、心臓パラメータは、圧力トレースの代表的な結果に表すことができます。動脈圧信号は、センサーが左心室内にある場合の収縮期血圧と拡張期血圧によって定義されます。左心室圧波形は、拡張期血圧がゼロに低下し、心室収縮前の左心房収縮が現れることを特徴としています。
最大正圧展開と最大負圧展開は、曲線の変曲点の一次導関数です。正常なマウスでは、ドブタミン滲出液中に左心室圧と心拍数が徐々に増加します。.予想通り、評価されたすべての血行動態パラメーターもドブタミンの用量依存的に増加します。
したがって、ドミンのクロノトロピック心拍数の増加と正の変力効果は、高脂肪食誘発性肥満マウスの正常なマウスと比較して証明されています。心臓ストレスが誘発された場合、心拍数の増加が小さく、陽圧の最大発現が観察され、試験した最高用量のドブタミンで統計的に有意でした。これらの差はベースライン条件では観察されませんでした。
この心臓負荷試験は、WTAの心における変力および時間的努力に基づいています。それぞれの信頼性は、それぞれの詳細に依存します。このビデオが、テクニックを設定し、短時間で自信を持って結果を得るのに役立つことを願っています。
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この記事では、心臓カテーテル検査でモニタリングしながら、ドブタミンによって誘発されたマウスの心臓負荷試験を行うプロトコルについて説明します。また、高脂肪食の肥満マウスの潜在的な心臓疾患を明らかにするためにこの方法を適用することも示します。
This protocol enables quantitative assessment of cardiac function under pharmacological stress, supporting target validation in cardiovascular drug discovery. By unmasking subclinical disease in obese models, it enhances predictive confidence for lead compounds and informs go/no-go decisions in preclinical portfolios. The method provides mechanistic de-risking through dose-dependent hemodynamic readouts relevant to translational biomarker alignment.
The method fits within the discovery continuum from target validation to preclinical assessment, enabling hemodynamic phenotyping at key inflection points.