グラフト動脈硬化のマウスモデル

次の実験の全体的な目標は、レシピエントの腹部大動脈にドナー血管を移植することです。最初のステップは、ドナーマウスから胸部大動脈を解剖することです。次に、吻合部位は、レシピエントマウスの腹部大動脈に作成されます。

その後、ドナー血管をレシピエント腹部大動脈に移植します。最終的に、移植の成功は、レシピエントマウスの無傷の後肢運動機能によってアクセスすることができます。したがって、このモデルは、移植片動脈硬化症の病因を理解するのに役立ちます。

そして、それは技術的に困難であり、多くの実践と患者が完璧であることが必要です。したがって、手順をデモンストレーションするのは、Chen博士とLouanneのアシスタントになります。まず、ドナーマウスの麻酔の適切な深さを確認します。

麻酔をかけたら、マウスを手術用顕微鏡の下のトレイの仰臥位に置きます。心臓を露出させて生理食塩水で洗い流した後、ヨウ素とアルコールを繰り返しこすり洗いして胸部をきれいにし、心臓と肺を取り外して胸部大動脈の全長を露出させます。視覚化したら、胸部大動脈を周囲の組織から慎重に解剖し始めます。

腰椎の枝に到達したら、大動脈の近くで絹の縫合糸で結紮してから切り取ります。周囲の組織から解放されたら、胸部大動脈全体を切除します。単離されたら、ドナー大動脈をヘパリン化生理食塩水で洗い流し、移植まで氷上のこの溶液に保存します。

レシピエントマウスに十分な麻酔を確保した後、腹部前部から毛皮を剃ります。眼科用軟膏で目を覆い、前に見たようにその領域をきれいにします。準備ができたら、マウスを手術用顕微鏡の下のトレイの仰臥位に置きます。

剣状突起から恥骨への正中線で腹壁を切開し、次にリトラクターを使用して壁を広げて腹腔を露出させます 露出したら、生理食塩水で湿らせたガーゼで腸を包み、腹腔から押し上げます。生理食塩水で湿らせたガーゼを多く使用して残りの腹部を包み込み、これを使用して直腸を腹部の右側に引っ込めます。次に、生殖器官を下方向に動かします。

生理食塩水を適用して、露出した組織を湿らせておくことを忘れないでください。腎血管の近位および大動脈分岐部の遠位に位置する腎下大動脈を定期的に特定します 鈍的。それを慎重に解剖して、下大静脈から分離します。

大動脈のこのセグメントに由来するすべての小さな枝をライゲーションして切り取ります。大動脈セグメントが分離されたら、両端に約5ミリメートル間隔で血管クランプを配置します。次に、クランプ間の腹部大動脈を横断することにより、吻合部を作成します。

鋭利なマイクロハサミを使用して、ドナー大動脈移植片を収容するために、片方の切断端から大動脈の小さなセグメントを切除します。ヘパリン化生理食塩水を使用してクランプ間の大動脈セグメントを洗い流し、残留血液を除去します。手順全体を通して、両方の大動脈サンプルをヘパリン化生理食塩水で定期的に洗浄することを忘れないでください。

次に、ドナー大動脈の両側を横断して、移植用に長さ2.5ミリメートルのセグメントグラフトを作成します。ドナー大動脈移植片を、連続縫合のために近位端と遠位端を並べる位置に置きます。ステー縫合糸を両端の3時と9時の位置に最初に配置します。

次に、切断された端を3〜4本のランニング縫合糸で結合し、ランニング縫合糸をステイ縫合糸にダブルノットで結び付けて、縫合糸を中断します。グラフトの両側の3時と9時の位置に4つの吻合部位を構築します。まずは。次に、これらの各サイトの間に配置された3〜4つのステッチでカットエッジを結合します。

縫合糸が所定の位置に配置されたら、遠位クランプを放して、グラフトへの逆行性の流れを可能にします。出血部位を特定し、3分以内に追加の縫合を行います。満足のいく止血が達成されたら、近位クランプアンプを解放します。

移植片の開存性は、激しい脈動の存在によって確認することができます。脈動が減少した場合は、ヘパリンを血管に注入して血栓症を予防します。準備ができたら、腸を腹腔に戻し、筋肉と皮膚の層を閉じて縫合します。

レシピエントマウスを暖かく清潔なケージに入れ、意識が戻るまで1〜2時間監視します。回復後のマウスの運動機能を評価し、2日目に再び、後肢の機能障害が観察されない場合は移植手術が成功します。手術の4週間後に採取した動脈移植片の組織学的解析により、男性ドナーの女性レシピエントの血管壁の厚さが増加していることが明らかになりました。

しかし、移植片動脈硬化は男性から男性へのグループでは観察されませんでした。この例では、男性ドナーからの胸動脈をインターフェロンガンマノックアウトマウスに移植し、次いで、インターフェロンガンマ発現をレシピエントマウスに誘導した。サンプルが採取される前。

数週間後、動脈移植片の組織学的分析により、治療群では移植片動脈硬化は観察されなかったことが示されています。これで、この手術の方法がわかりました。挑戦し続けてください。