高塩ダイエットとルイスラットにおける慢性腎臓病を誘発するために一酸化窒素合成酵素阻害と組み合わせた5/6thの腎摘出

この手順の全体的な目標は、ルイスラットの慢性腎臓病を誘発することです。これは、まず硝酸酸化物ブロッカー、NGニトロ、Lアルギニン、またはLNNAを4週間のP期間にわたって投与することで達成されます。次に、右腎臓全体を摘出します。

その後、1週間後に、左腎臓の3分の2を摘出します。最後に、LNNAと高塩食で治療を受けながら、ラットの腎不全の発症を時間とともに追跡します。最終的に、尿の採取によって蛋白質とヘマトクリット、および血液、血漿、および/または尿中のUIA、および収縮期血圧によって慢性腎臓病の確立を示す結果を得ることができます。

腎機能は最終的にイヌリンとパラアミノヒップレート、またはPAHクリアランスによって決定されます。この方法は、CKDの病理のより良い理解など、腎臓学分野の主要な質問に答えるのに役立ち、治療的介入の効果を研究するために使用できます。最初の腎切除手術の4週間前に。ラットの飲料水に硝酸酸化物合成酵素阻害剤LNNA20ミリグラム/リットルを投与し始めます。

このタイムラインによると。手順を開始する前に、70％アルコールでテーブルを消毒します。手術の準備として、以下の器具を滅菌することから始めます。12センチの学生用ティッシュフォーセット1本、1〜2本の歯、1本の学生用標準パターンフォーセット、2本のシンキンフォーセット、1本のメイヨはさみ、1本の学生用アイリスはさみ、そして1本のオルソンヘガー針ホルダーとはさみ。

次に、以下のインベントリを用意します。温水パッドとランプ付きのオペレーションテーブル、酸素、イソフロリンティッシュ。シェーバー、滅菌された手術器具、5×5および10×10の滅菌ガーゼ、70％アルコール、0.9％塩化ナトリウム溶液、1ミリリットルシリンジ、25ゲージ針、ジェルフォームパッド、4.0および5.0ビクリール縫合糸、0.03ミリグラム/キログラムのブプレノルフィン、および手術後のラットのための清潔なケージ。

誘導チャンバーで4％イソフロリンを使用して麻酔を誘発し、必要に応じてラットをテーブルの左側にある加熱パッドに移動し、2％イソフロリンと1リットルの酸素の混合物を使用して鼻コーンで換気をします。ラットの側面を剃り、アルコールで手術部位を消毒します。

手術は半滅菌環境で行われるため、より滅菌された準備のために、赤い皮膚のみをアルコールで消毒します。ベータジンでのスクラビングを使用できます。ヘッドキャップとマスクを着用し、滅菌手術用手袋を着用する前に手を洗って消毒します。次に、解剖学的フォーセットと鈍いはさみを使用して、肋骨に平行に1〜1.5センチメートルの切開を行います。

次に、背部筋肉の鈍い解離で、右腎臓を露出させます。腎臓の下極が見えるようになったら、小さな鈍いフォーセットを使用してペレン脂肪組織を慎重につかみます。次に、フォーセットを使用してペレン脂肪を優しく引っ張り、副腎を乱さないように注意しながら、腎臓を副腎から分離して外部に引き出します。

脂肪組織の内側の部位にフォーセットを配置し、副腎と腎臓の間の組織を優しく上に移動させます。腎臓をガーゼに優しく置き、周囲の脂肪組織と結合組織を取り除きます。腎動脈と腎静脈を識別し、ゆるく。

血管を囲んで単一の結び目で結び目を結び、結び目が滑り落ちるのを防ぎます。切断後、緩い結び目を血管に沿って大動脈に向かって約0.5センチメートル慎重に移動させ、腎臓と結び目の間にスペースを作ります。次に、結び目の端を切らずに2つの二重結び目を結びます。

血流が正常に停止すると、腎臓の色がすぐに茶色に変わります。次に、腎臓に近い血管を切断し、それを取り除きます。結び目の長い端を優しく引っ張って、腎臓血管からの出血を確認します。

結び目は血管に留まる必要があります。結び目の長い端を切ります。残りの腎臓血管は腹腔内に引っ込みます。

すぐに5.0ビクリールランニング縫合糸を使用して、後肢の骨格筋を閉じます。筋肉内に、0.03ミリグラム/キログラムのブプレノルフィンを注射します。次に、4.0ビクリール皮下縫合糸を使用して皮膚を閉じます。

次に、切除した腎臓を拭いて乾かし、重量を測定します。ラットを清潔な単独のケージに回復させ、加熱パッドの半分に置き、食物と水へのアクセスを提供し、テキストプロトコルに従って監視します。7日後。

2回目の手術の準備として、右腎臓の約3分の2の重量を計算し、小さなゲルフォームの断片を用意します。左腎臓を外部化し、副腎をそれから切り離す手順を繰り返します。左腎臓の上極の周りに鋭いはさみを置き、1回のストロークで上極を切除し、直ちにゲルフォームの断片で覆い、滅菌ガーゼで軽く圧力をかけます。

次に、腎臓の下極を切除し、同様の方法で覆って皮膚の血液凝固を防ぎます。腎臓を持ち上げ、滅菌ガーゼを使用して両方のゲルフォームパッドに軽い圧力をかけ、出血が止まるまで維持します。別のフォームパッドで出血が続く場合は、付着したゲルフォームパッドを持つ残りの腎臓を腹部内に置き、筋肉と皮膚を閉じます。

以前に説明したのと同じ手順に従って、回復を監視し、ラットを飼育します。部分腎切除後、総腎質量の約6分の1が残ります。この図は、右腎臓の除去された腎質量の計算されたパーセンテージを示しており、平均と標準偏差を示しています。

過去の実験では、週後に左腎臓の肥大が起こり、除去すべき腎組織の好ましい量のわずかな過小評価が結果として生じました。これは右腎臓の計算された重量に基づいていました。しかし、左腎臓の重量を決定することは不可能なので、これは約5/6の腎質量を除去するための最も正確な方法です。腎不全の進行は、タンパク質とクレアチニンの測定のための尿の採取、血液の血漿尿素とクレアチニン、および収縮期血圧によって追跡されます。

クレアチニンクリアランスを計算できますが、ラットの広範な尿細管クレアチニン分泌のため、GFRの低下に過小評価する傾向があり、イヌリンとPAHクリアランスによる腎機能の決定のゴールドスタンダー