ヒアルロン酸ナトリウムの網膜下注入によるげっ歯類における網膜剥離モデル

この手順の全体的な目標は、網膜下出血を伴わずに再現可能で持続的な剥離の高さを持つ実験的な網膜剥離を作成することです。これは、結膜を強膜から分離するために、後辺縁部の側頭結膜である最初のinciによって達成されます。2番目のステップでは、30ゲージの針の先端を使用して、セルフシール性強膜切開と角膜穿刺を行います。

次に、尿酸ナトリウムを網膜下腔に注入して、神経感覚網膜を下にある網膜色素上皮から切り離します。最終ステップでは、シアノアクリレート接着剤を強膜創傷に置き、結膜を元の位置に再度接着して、ナトリウムホール尿漏れのリスクを減らします。最終的に、カバーガラスを使用して眼底を検査し、網膜下出血を伴わないボーラス網膜剥離の生成を確認します。

げっ歯類の網膜剥離を減少させる既存の方法は、高さのばらつきと網膜剥離の持続性をもたらし、測定される細胞死亡率に一貫性がなくなる可能性があります。この技術により、網膜下痔核のリスクを減らしながら、再現性のある水疱性で持続的な網膜剥離を作り出すことができ、げっ歯類の網膜剥離の信頼性の高いモデルが可能になります。げっ歯類の実験的網膜剥離は、比較的簡単に実施でき、合理的な時間経過があり、人間の病気と非常によく似ています。

したがって、これは光受容体細胞死のメカニズムと視力喪失を防ぐための治療法を研究するための優れたモデルです。網膜変性疾患では、剥離した網膜における変篤な視細胞死が、網膜下出血を伴わずに再現性のある剥離を作り出すことが有利であることを知っている。これは、網膜剥離の持続時間の延長または網膜下出血の発生が視細胞死に影響を与える可能性があるためです。

8週齢のマウスに麻酔をかけた後、動物のひげを整え、次に5%フェニルリンと0.5%tropicを含む溶液で瞳孔を拡張させます。動物のcliaをカットし、局所麻酔、0.5%塩酸プロパン点眼液を適用します。マウスを鼻を外科医に向けて横方向の位置に置き、次に後輪部で側頭結膜を切開し、一対の鉗子を使用して結膜を強膜から分離します。

眼球の輪部で結膜をつかみ、目を制御します。次に、ベベルを上に向けて30ゲージの針を持ちます。針の先端を使用して強膜を貫通するトンネルを作り、網膜を貫通せずに強膜を脈絡膜に貫通させます。

次に、30ゲージの針を虹彩と平行に保持し、角膜を穿刺して眼圧を下げます。次に、ベベルを下に向けています。ハミルトン10マイクロリットルシリンジに接続された33ゲージの針を網膜下腔に挿入し、3.5マイクロリットルの尿酸ナトリウムを注入します。.

これにより、神経感覚網膜の約 50% が下にある網膜色素上皮から剥離します。鉗子を使用して、角膜穿刺の周りに角膜を押し込み、房水が角膜穿刺から流れ出るようにしてから、外科用セルロース槍を使用して強膜創からの漏れがないことを確認し、尿酸ナトリウムの漏れのリスクを減らします。シアノアクリレート接着剤を強膜の傷に置き、結膜を元の位置に再度取り付けます。

カバーガラスを使用して眼底をチェックし、網膜下出血を伴わないボーラス網膜剥離の作成を確認します。.最後に、感染のリスクを減らすために、抗生物質軟膏を目に塗ります。体温の低下を防ぐために、マウスを加熱パッドの上に置いてください。

低血圧に続いて。麻酔から目覚めた後、動物をケージに戻します。このプロトコルによって行われた網膜剥離の持続性を評価するために、剥離の誘導後3日目、7日目、および14日目にクライオ切片が作られました。

各時点について、ヘマチンとエオシンの6つの眼を使用しました。染色は、それぞれがボーラスを示した切片を視覚化するために使用されました。水晶体に近づく網膜剥離。

感染や水晶体損傷の兆候は見られませんでした。この手術を試みている間、この手順を試みる際には、ナトリウムの漏れ、高照度網膜下出血、または水晶体の損傷を引き起こすのを避けるために、各ステップを穏やかに実行することが重要です。このビデオを見た後、網膜下出血を伴わずに再現性のある持続的な剥離を伴うげっ歯類の実験的な網膜剥離を作成する方法を十分に理解しているはずです。